血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是在腫瘤細(xì)胞中通過(guò)表達(dá)，分泌到血液中的蛋白類生長(zhǎng)因子，促進(jìn)腫瘤血管的生成，進(jìn)而為腫瘤組織生長(zhǎng)提供足夠的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。研究人員利用pVAX1質(zhì)粒和VEGF基因構(gòu)建了pVAX1—VEGF的DNA疫苗，為腫瘤免疫治療奠定基礎(chǔ)?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）首先從人的肺癌細(xì)胞株A549中提取mRNA，通過(guò)

反轉(zhuǎn)錄

反轉(zhuǎn)錄

法獲得VEGF基因。
（2）對(duì)獲取的VEGF基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增前，需要根據(jù)VEGF基因序列設(shè)計(jì)兩種引物，設(shè)計(jì)兩種引物的原因是

基因的兩條反向平行的鏈都作為模板，其堿基序列不同

基因的兩條反向平行的鏈都作為模板，其堿基序列不同

。為便于VEGF基因與質(zhì)粒pVAX1連接，引物中要增加適當(dāng)?shù)?

（不同）限制酶酶切位點(diǎn)

（不同）限制酶酶切位點(diǎn)

。
（3）構(gòu)建的pVAX1—VEGF上應(yīng)含有特定的

啟動(dòng)子

啟動(dòng)子

（填“復(fù)制原點(diǎn)”“啟動(dòng)子”或“標(biāo)記基因”），它能被受體細(xì)胞的

RNA聚合酶

RNA聚合酶

所識(shí)別，以便于催化轉(zhuǎn)錄過(guò)程。
（4）DNA疫苗制備簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，且免疫強(qiáng)度高，應(yīng)答持久，但同時(shí)也可能存在著不可忽視的潛在危險(xiǎn)。你認(rèn)為可能存在的潛在危險(xiǎn)是

DNA疫苗注入體內(nèi)后，可能整合到宿主基因組上，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生變異，使細(xì)胞功能異常

DNA疫苗注入體內(nèi)后，可能整合到宿主基因組上，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生變異，使細(xì)胞功能異常

。