細(xì)菌的每一個(gè)質(zhì)粒都是復(fù)制子，作為一個(gè)復(fù)制單位，至少要有一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)，即ori位點(diǎn)。將ori區(qū)克隆到一個(gè)不能自主復(fù)制的環(huán)狀雙鏈DNA分子上，并引入到原核細(xì)胞后，該重組DNA具有自主復(fù)制能力。如質(zhì)粒pBR322，它包含以下幾個(gè)部分的DNA：①來源于pMB1質(zhì)粒的復(fù)制起點(diǎn)（ori）及rop區(qū)；②來源于質(zhì)粒pSC101的四環(huán)素抗性基因（tet^r）；③來源于轉(zhuǎn)座子Tn3的氨芐青霉素抗性基因（amp^r）。科學(xué)家計(jì)劃將人胰島素基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中作為生物反應(yīng)器來大量生產(chǎn)人胰島素，它們先將人胰島素基因處理后獲得以下片段，再與質(zhì)粒pBR322構(gòu)建基因表達(dá)載體。

（1）圖中所示的目的基因不能直接從基因組文庫中獲得，原因是

圖中所示胰島素基因的編目區(qū)是連續(xù)的，而人體（真核生物）細(xì)胞中基因的編碼區(qū)是不連續(xù)的

圖中所示胰島素基因的編目區(qū)是連續(xù)的，而人體（真核生物）細(xì)胞中基因的編碼區(qū)是不連續(xù)的

，處理思路是

以真核生物胰島B細(xì)胞中胰島素轉(zhuǎn)錄的成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄獲得對(duì)應(yīng)的cDNA

以真核生物胰島B細(xì)胞中胰島素轉(zhuǎn)錄的成熟mRNA為模板，逆轉(zhuǎn)錄獲得對(duì)應(yīng)的cDNA

。
（2）可以選擇

PvuⅡ和SalⅠ

PvuⅡ和SalⅠ

（填限制酶）進(jìn)行處理，最終獲得含有目的基因的高拷貝數(shù)質(zhì)粒。
（3）研究發(fā)現(xiàn)，作為受體細(xì)胞的大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)本來就存在圖3所示的質(zhì)粒，且構(gòu)建的基因表達(dá)載體中，既存在重組質(zhì)粒、也存在普通質(zhì)粒（pBR322）。為了更好地篩選出成功導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的細(xì)胞，研究人員計(jì)劃使用影印法：將導(dǎo)入質(zhì)粒的細(xì)胞接種在完全培養(yǎng)基中，待菌落長(zhǎng)出后將培養(yǎng)皿倒置于包有滅菌絲絨布的木質(zhì)圓柱印章上，使其沾上來自平板上的菌落。然后可把這一“印章”上的菌落分別接種到不同的選擇培養(yǎng)基平板上（圖4）。
應(yīng)選擇

SalⅠ和BamHⅠ

SalⅠ和BamHⅠ

（填限制酶）進(jìn)行處理，培養(yǎng)基A、B中分別添加

氨芐青霉素

氨芐青霉素

、

四環(huán)素

四環(huán)素

（填抗生素），導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)胞是

1、3

1、3

（填序號(hào)）。