表皮生長因子受體（EGFR）是原癌基因表達(dá)的產(chǎn)物。EGFR由胞外區(qū)、跨膜區(qū)、胞內(nèi)區(qū)三部分組成，EGFR與其配體結(jié)合后能引起一系列基因活化，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖。DNEGFR基因是EGFR基因缺失了胞內(nèi)區(qū)的突變基因，科研人員研究了DNEGFR基因表達(dá)和定位情況，流程如圖1，請回答：
?
（1）從人結(jié)腸癌組織中提取總RNA，經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過程合成cDNA．根據(jù)人EGFR前體cDNA的序列設(shè)計(jì)合成引物，擴(kuò)增得到DNEGFRcDNA，其表達(dá)產(chǎn)物因缺失胞內(nèi)區(qū)而沒有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，但其能夠與 EGFREGFR競爭結(jié)合配體，從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
（2）RT-PCR過程所用引物如下，據(jù)圖可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)使用的兩種限制酶是 NheⅠ和SacⅡNheⅠ和SacⅡ。研究人員將DNEGFR和EGFP融合在一起的目的是 借助EGFP基因的達(dá)產(chǎn)物來鑒定篩選成功導(dǎo)入DNEGFR基因的受體細(xì)胞，并以EGFP的位置來進(jìn)行DNEGFR的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位借助EGFP基因的達(dá)產(chǎn)物來鑒定篩選成功導(dǎo)入DNEGFR基因的受體細(xì)胞，并以EGFP的位置來進(jìn)行DNEGFR的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位。
5'-AAAAGCTAGCACCATGCGACCCTCCGGAC-3'
3'-TAATCCGCGTACGTACCGCATGAAGAGGCCGATCCC-5'
（3）本實(shí)驗(yàn)將EGFP序列融合在DNEGFR序列的下游而不是上游，原因是若將EGFP序列放在上游，①②①②。
①DNEGFR基因表達(dá)的前體蛋白的信號(hào)肽段不能發(fā)揮定位作用
②會(huì)影響配體與胞外區(qū)的結(jié)合
③會(huì)影響 EGFP 基因的表達(dá)
④會(huì)影響質(zhì)粒的復(fù)制
（4）向感受態(tài)細(xì)菌懸浮液中加入重組質(zhì)粒混勻。擴(kuò)大培養(yǎng)后取菌液涂布于卡那霉素篩選LB平板上，37℃正向放置0.5h,正向放置0.5h的目的是 使重組質(zhì)粒進(jìn)入感受態(tài)細(xì)菌使重組質(zhì)粒進(jìn)入感受態(tài)細(xì)菌，然后倒置平皿37℃培養(yǎng)12～16h。挑選菌落分別擴(kuò)增、鑒定，待鑒定正確后大量提取質(zhì)粒。
（5）將重組質(zhì)粒pEGFP-N1-DNEGFR包裹到主要由 磷脂雙分子層磷脂雙分子層構(gòu)成的脂質(zhì)體內(nèi)，與動(dòng)物細(xì)胞發(fā)生融合，重組質(zhì)粒最終發(fā)生轉(zhuǎn)化。72h后再利用光譜激光掃描共聚焦顯微鏡觀測結(jié)果見圖2A，檢測表明融合蛋白成功錨定于 細(xì)胞膜細(xì)胞膜，細(xì)胞質(zhì)存在少量熒光的原因可能是 信號(hào)肽段在翻譯后加工時(shí)被裂解，或轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)菌的是質(zhì)粒pEGFP-N1信號(hào)肽段在翻譯后加工時(shí)被裂解，或轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)菌的是質(zhì)粒pEGFP-N1。為了讓結(jié)果更加嚴(yán)謹(jǐn)，設(shè)置B、C兩組對照，推測 B組的處理方式是 含pEGFP-N1的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞含pEGFP-N1的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；EGFR；NheⅠ和SacⅡ；借助EGFP基因的達(dá)產(chǎn)物來鑒定篩選成功導(dǎo)入DNEGFR基因的受體細(xì)胞，并以EGFP的位置來進(jìn)行DNEGFR的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)定位；①②；使重組質(zhì)粒進(jìn)入感受態(tài)細(xì)菌；磷脂雙分子層；細(xì)胞膜；信號(hào)肽段在翻譯后加工時(shí)被裂解，或轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)菌的是質(zhì)粒pEGFP-N1；含pEGFP-N1的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染細(xì)胞
【解答】
【點(diǎn)評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/8/1 8:0:9組卷：15引用：1難度：0.6
相似題
-
1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
相關(guān)試卷