魚類養(yǎng)殖過程中，可以通過疫苗來增加魚類的特異性免疫功能，減少魚類的發(fā)病和防治藥物的使用，斑馬魚是一種重要的模式動(dòng)物，可用于魚類免疫學(xué)的研究?；卮鹣铝袉栴}：
（1）鰻弧菌是感染魚類的一種常見致病菌，采用基因工程技術(shù)敲除鰻弧菌的致病基因，使其喪失感染能力而保留其

抗原性

抗原性

，可以獲得鰻弧菌減毒活疫苗。
（2）為研究鰻弧菌減毒活疫苗的免疫效果可以測定相對(duì)免疫保護(hù)力（相對(duì)免疫保護(hù)力=1—免疫組累計(jì)死亡率/對(duì)照組累計(jì)死亡率）。請(qǐng)將下列步驟按順序排列為：

③④①②

③④①②

。
①給免疫組和對(duì)照組斑馬魚注射致病性的野生型鰻弧菌
②統(tǒng)計(jì)注射后14天內(nèi)免疫組和對(duì)照組的死亡率，計(jì)算相對(duì)免疫保護(hù)力
③通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定鰻弧菌減毒活疫苗的安全注射劑量
④以安全劑量給斑馬魚注射鰻弧菌減毒活疫苗，再飼養(yǎng)28天
（3）該疫苗總劑量8μg為最佳劑量，為確定最佳接種方案，進(jìn)一步進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)研究，如下表所示。注：A₁、B₁、C₁、D₁組分別接種該疫苗，A₂、B₂、C₂、D₂組分別接種X試劑

組別		A1	A2	B1	B2	C1	C2	D1	D2
接種試劑劑量	疫苗	8	/	a	/	a	/	a	/
	X	/	8	/	a	/	a	/	a
第一針接種時(shí)間		第0天
第二針接種時(shí)間		不接種		第14天		第21天		第28天
相應(yīng)抗體相對(duì)含量		14.7	0	169.5	0	282.7	0	218.0	0

①該實(shí)驗(yàn)的自變量有

是否接種疫苗、疫苗接種次數(shù)、兩次接種間隔時(shí)間

是否接種疫苗、疫苗接種次數(shù)、兩次接種間隔時(shí)間

。
②試劑X是

不含疫苗成分的試劑

不含疫苗成分的試劑

，a的劑量應(yīng)該為

8

8

。
③疫苗接種兩次組的抗體含量均明顯高于接種一次組，原因是

機(jī)體再次接觸相同抗原，產(chǎn)生更多的效應(yīng)細(xì)胞和記憶細(xì)胞

機(jī)體再次接觸相同抗原，產(chǎn)生更多的效應(yīng)細(xì)胞和記憶細(xì)胞

。
④疫苗苗兩次接種時(shí)間間隔

21天

21天

的效果最好，間隔時(shí)間過短影響效果的原因可能是

疫苗中的抗原與初次免疫后存留的抗體結(jié)合后被迅速清除

疫苗中的抗原與初次免疫后存留的抗體結(jié)合后被迅速清除

。