注射用生長激素主要是用于內(nèi)源性生長激素缺乏所引起的兒童生長障礙,還適用于重度燒傷、生長激素缺乏癥等。臨床常用的重組人生長激素是通過基因工程、發(fā)酵工程生產(chǎn)的。圖1表示生長激素基因及其上的限制酶酶切位點(diǎn),圖2表示質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)示意圖。請回答下列問題。
(1)生產(chǎn)重組人生長激素時,利用PCR技術(shù)可獲取和擴(kuò)增生長激素基因,擴(kuò)增時需要引物,引物是指 一小段能與DNA模板鏈的部分堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核酸一小段能與DNA模板鏈的部分堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核酸;PCR的產(chǎn)物一般通過 瓊脂糖凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳來鑒定。
(2)已知DNA新鏈的延長方向是從5'→3',即沿模板鏈3'→5',若要擴(kuò)增出生長激素基因并構(gòu)建重組質(zhì)粒,選擇的引物應(yīng)是圖1中的 引物4和引物5引物4和引物5,理由是 引物4和引物5都位于模板鏈的3'端,可以復(fù)制出目的基因,且復(fù)制出的目的基因包含限制酶的切割位點(diǎn)引物4和引物5都位于模板鏈的3'端,可以復(fù)制出目的基因,且復(fù)制出的目的基因包含限制酶的切割位點(diǎn)。
(3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時,應(yīng)選擇能識別圖2中 BamHⅠ和HindⅢBamHⅠ和HindⅢ酶切位點(diǎn)的限制酶;所用載體除質(zhì)粒以外,還可以是 λ噬菌體的衍生物、動植物病毒λ噬菌體的衍生物、動植物病毒(答出2點(diǎn)即可)。
(4)生產(chǎn)中,需將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌后進(jìn)行發(fā)酵。在發(fā)酵過程中,需要及時添加養(yǎng)分,并嚴(yán)格控制溫度、pH和溶氧量,原因是 環(huán)境條件不僅會影響微生物的生長繁殖,而且會影響微生物代謝物的形成環(huán)境條件不僅會影響微生物的生長繁殖,而且會影響微生物代謝物的形成。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合;DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】一小段能與DNA模板鏈的部分堿基序列互補(bǔ)配對的短單鏈核酸;瓊脂糖凝膠電泳;引物4和引物5;引物4和引物5都位于模板鏈的3'端,可以復(fù)制出目的基因,且復(fù)制出的目的基因包含限制酶的切割位點(diǎn);BamHⅠ和HindⅢ;λ噬菌體的衍生物、動植物病毒;環(huán)境條件不僅會影響微生物的生長繁殖,而且會影響微生物代謝物的形成
【解答】
【點(diǎn)評】
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