下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題：

限制酶	BamHⅠ	HindSⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)	G↓GATCC CCTAG↓G	A↓AGCTT TTCGA↓A	G↓AATTC CTTAA↓G	CCC↓GGG GGG↓CCC

（1）EcoRI斷開的是

鳥嘌呤脫氧核苷酸

鳥嘌呤脫氧核苷酸

和 

腺嘌呤脫氧核苷酸

腺嘌呤脫氧核苷酸

 之間的

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

鍵。一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有

0，2

0，2

 個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。
（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越

高

高

。
（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SrnaⅠ切割，原因是

會(huì)破壞質(zhì)粒中的標(biāo)記基因和外源DNA中的目的基因

會(huì)破壞質(zhì)粒中的標(biāo)記基因和外源DNA中的目的基因

。
（4）與只使用EcoR I相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以實(shí)現(xiàn)

目的基因和質(zhì)粒的定向連接

目的基因和質(zhì)粒的定向連接

。BamHⅠ切割DNA后形成的是

黏性

黏性

末端，寫出該末端

-CTAG或GATC-

-CTAG或GATC-

。
（5）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了

鑒別和篩選含有目的基因的受體細(xì)胞

鑒別和篩選含有目的基因的受體細(xì)胞

。如果是四環(huán)素抗性基因，可以在培養(yǎng)基中加

四環(huán)素

四環(huán)素

來幫助實(shí)現(xiàn)該作用。
（6）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在

四環(huán)素

四環(huán)素

的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測。