我國有大面積的沿海灘涂和鹽堿地,利用生物技術(shù)培育出耐鹽農(nóng)作物??梢院侠砝眠@些沿海灘涂和鹽堿地,以此增大我國的人均可用耕地面積。如圖表示構(gòu)建基因表達(dá)載體所用到的外源DNA和質(zhì)粒,其中箭頭指向是限制酶識(shí)別的核苷酸序列所在位置。另外,BamHⅠ,SmaⅠ和HindⅢ三種限制酶切割DNA時(shí)形成的末端均不同。請回答下列問題。
(1)可以從耐鹽菌的基因文庫中獲得耐鹽基因?;蛭膸彀?基因組文庫和cDNA文庫基因組文庫和cDNA文庫。獲得的耐鹽基因在細(xì)胞外進(jìn)行擴(kuò)增時(shí),常采用的技術(shù)是 PCR技術(shù)PCR技術(shù)。該技術(shù)用到的酶與普通的胞內(nèi)酶相比,最大的特點(diǎn)是 耐高溫耐高溫。
(2)構(gòu)建該重組質(zhì)粒時(shí),不能使用限制酶SmaⅠ進(jìn)行酶切,理由是 SmaⅠ會(huì)破壞耐鹽基因,切割外源DNA時(shí)只能用到BamH1和HindⅢ,這兩種酶切割外源DNA形成的末端與SmaI切割質(zhì)粒形成的末端不同,無法進(jìn)行拼接SmaⅠ會(huì)破壞耐鹽基因,切割外源DNA時(shí)只能用到BamH1和HindⅢ,這兩種酶切割外源DNA形成的末端與SmaI切割質(zhì)粒形成的末端不同,無法進(jìn)行拼接。
(3)就一個(gè)完整的基因表達(dá)載體而言,圖中未標(biāo)出的特殊DNA序列是 終止子終止子、啟動(dòng)子啟動(dòng)子,其中后者具有 RNA聚合RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)。
(4)設(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn),從細(xì)胞水平上鑒定受體細(xì)胞內(nèi)是否成功導(dǎo)入該重組質(zhì)粒。請寫出簡要實(shí)驗(yàn)思路:將進(jìn)行轉(zhuǎn)化處理的受體細(xì)胞置于分別含氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上,檢測受體細(xì)胞是否存活將進(jìn)行轉(zhuǎn)化處理的受體細(xì)胞置于分別含氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上,檢測受體細(xì)胞是否存活。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】基因組文庫和cDNA文庫;PCR技術(shù);耐高溫;SmaⅠ會(huì)破壞耐鹽基因,切割外源DNA時(shí)只能用到BamH1和HindⅢ,這兩種酶切割外源DNA形成的末端與SmaI切割質(zhì)粒形成的末端不同,無法進(jìn)行拼接;終止子;啟動(dòng)子;RNA聚合;將進(jìn)行轉(zhuǎn)化處理的受體細(xì)胞置于分別含氨芐青霉素和四環(huán)素的培養(yǎng)基上,檢測受體細(xì)胞是否存活
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:5引用:1難度:0.5
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