Ⅰ．隨著基因工程的發(fā)展，人類(lèi)利用羊細(xì)胞生物獲得新的生物產(chǎn)量越來(lái)越廣泛，近年來(lái)，研究人員發(fā)現(xiàn)萊茵衣藻在這方面也有不錯(cuò)的發(fā)展前景．萊茵衣藻是羊細(xì)胞真核綠藻，它是目前唯一能特異性地對(duì)細(xì)胞核、葉綠體和線粒體基因組進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的真核生物．
（1）培養(yǎng)衣藻菌一定光照、從衣藻的代謝類(lèi)型方面考慮，在其培養(yǎng)基中不需加入

碳源

碳源

營(yíng)養(yǎng)成分，培養(yǎng)過(guò)程中還需要進(jìn)行振蕩，其目的是

讓衣藻與二氧化碳、培養(yǎng)液充分混勻

讓衣藻與二氧化碳、培養(yǎng)液充分混勻

．
（2）有研究者發(fā)現(xiàn)振蕩培養(yǎng)會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率，他設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)探究振蕩時(shí)間與衣藻轉(zhuǎn)化效率的關(guān)系，結(jié)果如圖所示：

該研究結(jié)果可說(shuō)明

隨著振蕩時(shí)間的增加，衣藻轉(zhuǎn)化效率先增加再降低，在3D時(shí)，轉(zhuǎn)化效率最高

隨著振蕩時(shí)間的增加，衣藻轉(zhuǎn)化效率先增加再降低，在3D時(shí)，轉(zhuǎn)化效率最高

．
（3）基因工程中用衣藻作為受體細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)是

繁殖快、單細(xì)胞、易培養(yǎng)

繁殖快、單細(xì)胞、易培養(yǎng)

．衣藻轉(zhuǎn)化的原理是

可以對(duì)真核生物的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工

可以對(duì)真核生物的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工

當(dāng)轉(zhuǎn)化的DNA分子通過(guò)

核孔

核孔

進(jìn)入細(xì)胞核中時(shí)，乙隨機(jī)和非同源方式整合到細(xì)胞核基因組的不同位點(diǎn)，該過(guò)程有

限制酶和DNA連接酶

限制酶和DNA連接酶

的參與．
Ⅱ．如表中列出了幾種限制酶識(shí)別系列及其切割位點(diǎn)，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

限制酶	EamHⅠ	HtndⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
識(shí)別序列及切割位點(diǎn)

（4）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有

0、2

0、2

個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．
（5）與只使用EcoR　I相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止

質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化

質(zhì)粒和含有目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化

．
（6）為了從cDNA文庫(kù)中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在

以蔗糖為唯一碳源

以蔗糖為唯一碳源

的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)．