研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育表達(dá)綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株。主要過(guò)程如圖（圖中a鏈和b鏈分別是相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈）。
（1）第①步：PCR擴(kuò)增sGFP基因。PCR擴(kuò)增sGFP的原理是 DNA雙鏈復(fù)制DNA雙鏈復(fù)制；圖中b鏈的堿基序列黏性末端（5′→3′）為 AGCTAGCT。
（2）第②步：目的基因與運(yùn)載體結(jié)合。②需要的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶，此時(shí)目的基因插入到 構(gòu)巢曲霉構(gòu)巢曲霉啟動(dòng)子之后，目的是 保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)。
（3）第③步：目的基因?qū)氪篼愝喼?。該過(guò)程需要先將目的基因?qū)朕r(nóng)桿菌，而后將轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌放置于含有 潮霉素潮霉素的培養(yǎng)基上，篩選出含有目的基因的農(nóng)桿菌。將導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細(xì)胞懸液中，在適宜條件下完成轉(zhuǎn)染后利用濾膜過(guò)濾得到孢子細(xì)胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過(guò)檢測(cè) 熒光強(qiáng)度熒光強(qiáng)度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達(dá)的大麗輪枝菌。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】DNA雙鏈復(fù)制；AGCT；DNA連接酶；構(gòu)巢曲霉；保證sGFP基因可以在大麗輪枝菌細(xì)胞中表達(dá)；潮霉素；熒光強(qiáng)度
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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