從自然界中的生物體內(nèi)分離得到的天然酶,在工業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中催化效率往往較低。研究人員利用易錯PCR技術對某種天然酶進行改造,獲得了高催化效率的酶。易錯PCR是利用低保真的Taq酶和改變PCR的反應條件,降低DNA復制的準確性,在新DNA鏈的合成過程中增加堿基錯配,從而使擴增產(chǎn)物出現(xiàn)較多點突變的一種體外誘導DNA序列變異的方法。如圖是利用易錯PCR改造某種天然酶的流程示意圖?;卮鹣铝袉栴}:
(1)Taq酶的某一區(qū)域負責將堿基與模板鏈正確地互補配對,Mn2+可以降低這一功能;非互補的堿基對由于氫鍵不易形成,穩(wěn)定性差,Mg2+可以提高該錯配區(qū)的穩(wěn)定性。因此,與普通PCR相比,易錯PCR的反應體系中應適當 提高提高(填“提高”或“降低”)Mn2+濃度、提高提高(填“提高”或“降低”)Mg2+濃度。
(2)圖中步驟①為易錯PCR過程,其擴增過程包括 變性、復性、延伸變性、復性、延伸三步。在擴增過程中,不需要在每次循環(huán)中重復加入Taq酶,是因為Taq酶具有 耐高溫(或在高溫下能保持酎的話性)耐高溫(或在高溫下能保持酎的話性)的特點。
(3)圖中步驟②是將構(gòu)建的重組質(zhì)粒溶于緩沖液中與用 Ca2+Ca2+處理的受體菌混合,在一定溫度下完成轉(zhuǎn)化。轉(zhuǎn)化是指 目的基因進入受體細胞并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程目的基因進入受體細胞并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程。
(4)請闡述通過易錯PCR技術改造天然酶與通過蛋白質(zhì)工程改造天然酶的本質(zhì)區(qū)別。 易錯PCR技術是利用基因突變的原理末改造天然配,是不定向的;而蛋白質(zhì)工程是利用基因重組的原理來改造天然酶,是定向的易錯PCR技術是利用基因突變的原理末改造天然配,是不定向的;而蛋白質(zhì)工程是利用基因重組的原理來改造天然酶,是定向的。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】提高;提高;變性、復性、延伸;耐高溫(或在高溫下能保持酎的話性);Ca2+;目的基因進入受體細胞并在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程;易錯PCR技術是利用基因突變的原理末改造天然配,是不定向的;而蛋白質(zhì)工程是利用基因重組的原理來改造天然酶,是定向的
【解答】
【點評】
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