玉米是我國(guó)重要的糧食作物和飼料來(lái)源，低溫會(huì)影響玉米的產(chǎn)量和品質(zhì)。研究者將從微生物中獲得的CSP（冷激蛋白）基因與玉米基因的ubi啟動(dòng)子相連后構(gòu)建基因表達(dá)載體，并將其導(dǎo)入玉米細(xì)胞中，獲得了具有低溫耐受性的玉米植株，過(guò)程如圖1所示。
（1）研究者提取玉米的DNA，利用PCR技術(shù)將ubi啟動(dòng)子擴(kuò)增出來(lái)。該過(guò)程需設(shè)計(jì)合適的引物，引物設(shè)計(jì)時(shí)需已知ubi兩端的一段序列ubi兩端的一段序列，為便于進(jìn)行后續(xù)操作還在引物中添加了限制酶的識(shí)別序列。在反應(yīng)體系內(nèi)，至少需33次擴(kuò)增才能獲得所需的ubi啟動(dòng)子。
（2）圖1所示的流程圖中，過(guò)程①需限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶的催化，獲得的ubi-CSP基因在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，在Ti質(zhì)粒上的插入部位為T-DNA內(nèi)部（且不破壞hpt）T-DNA內(nèi)部（且不破壞hpt）。過(guò)程②需要用CaCl2溶液處理農(nóng)桿菌，其目的是獲得感受態(tài)細(xì)胞獲得感受態(tài)細(xì)胞。過(guò)程③完成后，將玉米愈傷組織轉(zhuǎn)入含潮霉素潮霉素的培養(yǎng)基中進(jìn)行篩選，篩選后的愈傷組織再經(jīng)培育獲得轉(zhuǎn)基因玉米。
（3）研究者分別提取了野生型玉米及5株轉(zhuǎn)基因玉米的染色體DNA，用限制酶處理后進(jìn)行電泳。電泳后的DNA與基因探針進(jìn)行雜交，到圖2所示放射性檢測(cè)結(jié)果，該基因探針應(yīng)為含放射性同位素標(biāo)記的CSP基因含放射性同位素標(biāo)記的CSP基因片段，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明除植株3外，其他4株轉(zhuǎn)基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色體基因組中除植株3外，其他4株轉(zhuǎn)基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色體基因組中。
（4）在個(gè)體水平上對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米植株進(jìn)行低溫耐受性低溫耐受性實(shí)驗(yàn)，可檢測(cè)CSP基因是否已在玉米中表達(dá)。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】ubi兩端的一段序列；3；限制酶和DNA連接酶；T-DNA內(nèi)部（且不破壞hpt）；獲得感受態(tài)細(xì)胞；潮霉素；含放射性同位素標(biāo)記的CSP基因；除植株3外，其他4株轉(zhuǎn)基因玉米中CSP基因均已整合到玉米染色體基因組中；低溫耐受性
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：22引用：3難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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