某研究小組開展“豬血漿某白蛋白的提取及分子量測定”研究，請協(xié)助完成有關(guān)問題。
材料用具：新鮮豬血、離心機、透析袋電泳儀等。
化學(xué)試劑：pH為7.4的緩沖液、檸檬酸鈉、奈氏試劑（與NH₄⁺反應(yīng)出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀）、飽和（NH₄）₂SO₄溶液、生理鹽水等。
實驗步驟：
（1）樣品獲取：向新鮮豬血中加入

（適量的）檸檬酸鈉

（適量的）檸檬酸鈉

，低速離心后取

上層

上層

（填“上層”或“下層”）血漿。
（2）鹽析法粗提蛋白質(zhì)：
①向血漿中加入一定體積的飽和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的濃度達(dá)到50%，充分混合后靜置、離心，取沉淀物。
②向沉淀物中加入適量生理鹽水使之溶解，再向其中加入一定體積的飽和（NH₄）₂SO₄溶液，使（NH₄）₂SO₄的濃度達(dá)到33%，充分混合后靜置、離心，取沉淀物。
③重復(fù)步驟①、②2～3次，最后用生理鹽水將沉淀溶解即得粗提品。鹽析粗提“血漿某白蛋白”的主要原理是

該血漿白蛋白在50%和33%的 溶液中溶解度低

該血漿白蛋白在50%和33%的 溶液中溶解度低

，重復(fù)步驟①、②的主要目的是

除去更多的雜蛋白

除去更多的雜蛋白

。
（3）透析除鹽：將粗提品裝入透析袋，以pH為7.4的緩沖液作透析液，每隔4h更換一次透析液，每次更換前利用奈氏試劑檢測透析液中NH₄⁺的量。利用緩沖液作透析液的目的是

避免因pH變化對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成破壞（或抵制酸堿pH變化對溶液pH的影響，維持pH不變）

避免因pH變化對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)造成破壞（或抵制酸堿pH變化對溶液pH的影響，維持pH不變）

。檢測中，若觀察到透析液

不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀

不出現(xiàn)黃色或紅棕色沉淀

時，即可終止透析。
（4）凝膠色譜法分離：透析后的樣品經(jīng)凝膠柱洗脫，獲得純凈血漿某白蛋白樣品。在凝膠柱中，相對分子質(zhì)量較

大

大

的蛋白質(zhì)移動速度較快。
（5）分子量測定：化學(xué)物質(zhì)SDS能使蛋白質(zhì)變性，解聚成單條肽鏈。在聚丙烯酰胺凝膠電泳中加入一定量的SDS，電泳遷移率完全取決于肽鏈的分子大小。如圖為本實驗中用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血漿某白蛋白的結(jié)果。根據(jù)電泳結(jié)果，某同學(xué)得出“提取的血漿某白蛋白有兩條肽鏈”的結(jié)論，這種說法可靠嗎？理由是

不可靠，只能得出提取的血漿某白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈，不一定是兩條

不可靠，只能得出提取的血漿某白蛋白含有兩種大小不同的肽鏈，不一定是兩條

。