植物內(nèi)生菌是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內(nèi)部的真菌或細(xì)菌，普遍存在于高等植物中。
（1）放線菌也是一種常見的內(nèi)生菌，能抑制病原菌的生長。研究者利用兩種不同類型的放線菌獲得新型工程菌，過程如圖：

收集上述兩種菌絲體，加入

溶菌酶

溶菌酶

（填“纖維素酶”或“溶菌酶”）處理，分離原生質(zhì)體，將兩種原生質(zhì)體懸液等量混合，加入適量促融劑處理一段時(shí)間。終止反應(yīng)并洗滌后，取一定量混合液接種于

固體

固體

（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基中培養(yǎng)。根據(jù)菌落特征，選出性狀穩(wěn)定的融合菌株。
（2）某真菌的w基因可編碼一種可高效降解纖維素的酶，已知圖中w基因轉(zhuǎn)錄方向是從左往右。為使放線菌產(chǎn)生該酶，以圖中質(zhì)粒為載體，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因。

限制酶	BamHⅠ	EcoRⅠ	MfeⅠ	KpnⅠ	HindⅢ
識(shí)別序列和切割位點(diǎn)（5′→3′）	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

??①限制酶主要是從

原核生物

原核生物

中分離純化出來的。應(yīng)使用限制酶

MfeI、HindⅢ

MfeI、HindⅢ

切割圖中質(zhì)粒，使用限制酶

EcoRI、HindⅢ

EcoRI、HindⅢ

切割圖中含w基因的DNA片段，以獲得能正確表達(dá)w基因的重組質(zhì)粒。
②與質(zhì)粒中啟動(dòng)子結(jié)合的酶是

RNA聚合酶

RNA聚合酶

。啟動(dòng)子通常具有物種特異性，在質(zhì)粒中插入w基因，其上游啟動(dòng)子應(yīng)選擇

放線菌

放線菌

啟動(dòng)子（填生物類型）。
③W基因轉(zhuǎn)錄的模板鏈?zhǔn)?

乙鏈

乙鏈

。利用PCR技術(shù)對W基因進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)子鏈延伸的方向是

5′→3′

5′→3′

。
④研究人員利用W基因的mRNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄得到了cDNA，已知mRNA的序列為5′-UGAACGCUA…（中間序列）…GUCGACUCG-3′。利用PCR技術(shù)對cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，為便于將擴(kuò)增后的基因和載體連接構(gòu)建重組質(zhì)粒，請寫出PCR擴(kuò)增時(shí)所需引物的前12個(gè)堿基序列5′

GAATTC（或CAATTG）TGAACG、AAGCTTCGAGTC

GAATTC（或CAATTG）TGAACG、AAGCTTCGAGTC

3′。