當前，臨床上常采用RT-PCR技術（以mRNA逆轉錄為cDNA，再進行PCR擴增）對受試者的咽拭子取樣后進行新型冠狀病毒核酸檢測。以下是某醫(yī)院發(fā)熱門診醫(yī)生采用該項技術對受試者進行新型冠狀病毒核酸檢測的相關操作步驟：
①從受試者組織樣本中提取MRNA；
②分析PCR擴增結果；
③利用PCR護增cDNA片段；
④采集受試者組織樣本；
⑤用mRNA逆轉錄得到DNA。
回答下列問題：
（1）得到科學而準確的檢測結果是進行新型冠狀病毒核酸檢測的基本要求，上述符合RT-PCR技術的正確操作順序應是

④①⑤③②

④①⑤③②

（用數(shù)字序號表示）。
（2）RT-PCR操作過程中，所需的酶有

逆（反）轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

逆（反）轉錄酶和耐高溫的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）

。在進行RT-PCR擴增時，引物在復制過程中可與

模板鏈（cDNA）中相應互補的堿基序列

模板鏈（cDNA）中相應互補的堿基序列

結合，繼而產(chǎn)生相應擴增酶的結合位點。
（3）RT-PCR的產(chǎn)物經(jīng)過BamHI、EcoRI雙限制酶處理以后，再與經(jīng)過同樣雙酶處理的小雙節(jié)病毒（PBV）載體連接，該操作屬于基因工程操作步驟中的

構建基因表達載體

構建基因表達載體

，這也是基因工程的核心步驟。與單一限制酶處理相比，雙限制酶處理的優(yōu)點是

防止目的基因（載體）自身連接；防止目的基因與運載體反向連接

防止目的基因（載體）自身連接；防止目的基因與運載體反向連接

（答出2點即可）。
（4）利用RT-PCR技術獲取的目的基因

能

能

（填“能”或“不能”）在物種間進行交流，其原因是

RT-PCR技術獲取的目的基因通常無內(nèi)含子等非編碼序列，利于基因交流（或生物界共用一套遺傳密碼子）

RT-PCR技術獲取的目的基因通常無內(nèi)含子等非編碼序列，利于基因交流（或生物界共用一套遺傳密碼子）

。該技術還可用于對某些微量RNA病毒的檢測，可以有效提高檢測的靈敏度，其原因是

增加了待測RNA逆轉錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測

增加了待測RNA逆轉錄產(chǎn)生的DNA的數(shù)量（或濃度），便于檢測

。