R-7是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA，可與某些mRNA尾端的一段非編碼序列（3′-MTR）結(jié)合，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。為研究R-7是否影響家蠶基因B（調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育）的表達(dá)，科研人員將基因B中對(duì)應(yīng)3′-MTR的DNA片段與熒光素酶基因重組（R-7不影響熒光素酶基因的表達(dá)，在適宜條件下，熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光），如圖1所示。將該重組載體導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞并檢測(cè)其表達(dá)情況，結(jié)果如圖2所示?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）基因工程的第一個(gè)步驟是

獲取目的基因

獲取目的基因

。通過(guò)3′-MTR獲取3′-MTR的DNA片段的可行性方法是

以3'-MTR為模板，逆轉(zhuǎn)錄人工合成3'-MTR的DNA片段

以3'-MTR為模板，逆轉(zhuǎn)錄人工合成3'-MTR的DNA片段

。要想短時(shí)間內(nèi)獲得大量目的基因，需要用到的技術(shù)是

PCR擴(kuò)增技術(shù)

PCR擴(kuò)增技術(shù)

。
（2）圖1中所示的基因表達(dá)載體中含有啟動(dòng)子、終止子和

標(biāo)記基因（或熒光素酶基因）

標(biāo)記基因（或熒光素酶基因）

。目的基因（3′-MTR的DNA）片段應(yīng)插入位點(diǎn)

2

2

。
（3）科研人員從圖2所示的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)，經(jīng)處理檢測(cè)后獲得相對(duì)熒光值。實(shí)驗(yàn)組為將重組載體導(dǎo)入含R-7的家蠶胚胎細(xì)胞中，對(duì)照組1為將重組載體導(dǎo)入不含（或去除）R-7的家蠶胚胎細(xì)胞中，則對(duì)照組2應(yīng)為

將不含對(duì)應(yīng)3′-MTR的DNA片段（含有熒光素酶基因）的表達(dá)載體導(dǎo)入含R-7的家蠶胚胎細(xì)胞中

將不含對(duì)應(yīng)3′-MTR的DNA片段（含有熒光素酶基因）的表達(dá)載體導(dǎo)入含R-7的家蠶胚胎細(xì)胞中

。由結(jié)果推知，R-7通過(guò)

與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA尾端的3’-MTR結(jié)合

與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA尾端的3’-MTR結(jié)合

進(jìn)而抑制基因B的表達(dá)。