CRISPR/Cas9是一種基因編輯技術(shù)，科研人員對(duì)其進(jìn)行了一系列改造。

（1）Cas9蛋白能與人工設(shè)計(jì)的sgRNA形成復(fù)合體（如圖1）。復(fù)合體中的sgRNA與目的基因按照

堿基互補(bǔ)配對(duì)

堿基互補(bǔ)配對(duì)

原則特異性結(jié)合。復(fù)合體在sgRNA引導(dǎo)下結(jié)合目的基因，Cas9蛋白切割目的基因造成雙鏈斷裂，細(xì)胞在修復(fù)斷裂的DNA時(shí)會(huì)隨機(jī)插入、刪除或替換部分堿基對(duì)，從而引發(fā)

基因突變

基因突變

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（2）將編碼Cas9蛋白的基因改造后形成新基因dCas9，與Cas9蛋白相比，dCas9蛋白失去剪切活性，但與sgRNA結(jié)合等功能不變。構(gòu)建能夠表達(dá)dCas9的質(zhì)粒A，設(shè)計(jì)一系列與紅色熒光蛋白基因（RFP基因）上游不同部位結(jié)合的sgRNA序列（如圖2），并以此為依據(jù)構(gòu)建能表達(dá)sgRNA的質(zhì)粒B，將質(zhì)粒A、B共同導(dǎo)入含有 RFP基因的大腸桿菌，測(cè)定大腸桿菌紅色熒光強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組的紅色熒光強(qiáng)度約為sgRNA3組的

100

100

倍。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出：

dCas9能抑制基因表達(dá)，sgRNA的結(jié)合位置距RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)越近，對(duì)基因表達(dá)的抑制作用越強(qiáng)

dCas9能抑制基因表達(dá)，sgRNA的結(jié)合位置距RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)越近，對(duì)基因表達(dá)的抑制作用越強(qiáng)

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（3）VP64蛋白可結(jié)合RNA聚合酶，激活基因的轉(zhuǎn)錄，但VP64蛋白無法識(shí)別或結(jié)合特定的DNA片段?？蒲腥藛T欲利用上述系統(tǒng)和VP64蛋白促進(jìn)特定基因表達(dá)，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)促進(jìn)細(xì)胞中已存在的基因X表達(dá)的方案。
（4）請(qǐng)寫出CRISPR/Cas9及其改造產(chǎn)品的在科學(xué)研究中的應(yīng)用。