β-1，3葡聚糖酶可以水解許多病原真菌細(xì)胞壁外層的β-1，3葡聚糖和幾丁質(zhì)，降解真菌細(xì)胞壁，從而抑制真菌的生長與繁殖。研究人員在植物中克隆到β-1，3葡聚糖酶基因（BG2）并轉(zhuǎn)入蘋果主栽品種，以減少蘋果真菌病害、實現(xiàn)無公害生產(chǎn)。據(jù)圖回答下列問題：

（1）BG2的克隆可利用PCR技術(shù)，需要一小段能與該基因堿基序列互補(bǔ)配對的

短單鏈核酸

短單鏈核酸

作為引物，BG2在克隆前，需準(zhǔn)備

2

2

種引物。
（2）如圖為利用PATC940（經(jīng)農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒改造獲得）構(gòu)建BG2抗病質(zhì)粒的過程。圖中右下處的酶為DNA連接酶，人工設(shè)計的復(fù)合啟動子的作用是驅(qū)動轉(zhuǎn)錄和提高（增強(qiáng)）轉(zhuǎn)錄活性，它位于目的基因（BG2）的

上游

上游

（填“上游”或“下游”）。用XbaⅠ酶切、SpeⅠ酶切、NotⅠ酶切目的基因與PATC940的優(yōu)點是構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可以防止

Ti質(zhì)粒自身環(huán)化

Ti質(zhì)粒自身環(huán)化

、

目的基因自身環(huán)化

目的基因自身環(huán)化

以及防止目的基因與質(zhì)粒反向連接。
（3）中國科學(xué)家獨創(chuàng)的一種方法，將Bt基因?qū)朊藁?xì)胞，這種方法是

花粉管通道法

花粉管通道法

，例如，可以用微量注射器將含目的基因的DNA溶液直接注入

子房

子房

中、研究人員將轉(zhuǎn)入BG2抗病質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與蘋果外植體共培養(yǎng)，進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。目的基因BG2將隨著T-DNA轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞而進(jìn)入細(xì)胞，并隨其整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。
（4）在完成遺傳轉(zhuǎn)化后，培養(yǎng)基中至少要加入兩種抗生素，請推測其作用分別是：一種用于殺死農(nóng)桿菌，另一種用于

成功轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒細(xì)胞（組織）的篩選/檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞

成功轉(zhuǎn)化重組質(zhì)粒細(xì)胞（組織）的篩選/檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞

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