正常細(xì)胞不能合成干擾素，但含有干擾素基因。我國(guó)科學(xué)家采用基因工程技術(shù)生 產(chǎn)干擾素a-2b已實(shí)現(xiàn)量產(chǎn)。具體做法是將產(chǎn)生干擾素的人白細(xì)胞的mRNA分級(jí)分離，反轉(zhuǎn)錄得到干擾素基因。將含有四環(huán)素、氨節(jié)青霉素抗性基因的質(zhì)粒pBR322和干擾素 基因進(jìn)行雙酶切，用連接酶連接。將重組載體DNA分子在一定條件下導(dǎo)入大腸桿菌，在 培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)，檢測(cè)干擾素的表達(dá)量，選出高效表達(dá)的工程菌。請(qǐng)回答：
（1）在分化誘導(dǎo)因子作用下，正常細(xì)胞可以擺脫抑制、合成干擾素，該過(guò)程發(fā)生的實(shí)質(zhì)是

基因的選擇性表達(dá)

基因的選擇性表達(dá)

。
（2）據(jù)圖分析，構(gòu)建重組載體DNA分子時(shí)，可以選用

酶B、酶C

酶B、酶C

兩種限制酶對(duì)質(zhì)粒pBR322和干擾素基因進(jìn)行雙酶切，目的是既能保證目的基因和質(zhì)粒正向連接，又能防止

質(zhì)粒與目的基因自身環(huán)化；防止同時(shí)破壞質(zhì)粒中的兩個(gè)標(biāo)記基因

質(zhì)粒與目的基因自身環(huán)化；防止同時(shí)破壞質(zhì)粒中的兩個(gè)標(biāo)記基因

（答兩點(diǎn)）。

（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中，然后將細(xì)菌涂布到含

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的選擇培養(yǎng)基上培 養(yǎng)，就可得到質(zhì)粒pBR322或重組質(zhì)粒的細(xì)菌單菌落；再?gòu)拿恳粋€(gè)單菌落中挑取部分細(xì) 菌轉(zhuǎn)涂到含有

四環(huán)素

四環(huán)素

的培養(yǎng)基上，不能生長(zhǎng)的絕大部分是含有重組質(zhì)粒的細(xì)菌，原因是

目的基因的插入破壞了四環(huán)素抗性基因，重組質(zhì)粒上只含有氨芐青霉素抗性基因，而質(zhì)粒上含氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌不能生長(zhǎng)，而只導(dǎo)入質(zhì)粒的細(xì)菌能生長(zhǎng)

目的基因的插入破壞了四環(huán)素抗性基因，重組質(zhì)粒上只含有氨芐青霉素抗性基因，而質(zhì)粒上含氨芐青霉素抗性基因和四環(huán)素抗性基因，在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上，導(dǎo)入重組質(zhì)粒的細(xì)菌不能生長(zhǎng)，而只導(dǎo)入質(zhì)粒的細(xì)菌能生長(zhǎng)

。
（4）干擾素在體外保存非常困難，如果將其分子中的一個(gè)半胱氨酸變成絲氨酸，在-70℃條件下可以保存半年。實(shí)現(xiàn)這一轉(zhuǎn)變需要直接對(duì)

基因

基因

進(jìn)行修飾或改造，這屬于蛋白質(zhì)工程的范疇。