野生酵母菌不能利用粗纖維,科學家將β-甘露聚糖酶基因?qū)胴i腸道野生酵母菌細胞中,β-甘露聚糖酶基因編碼的酶能將粗纖維分解成單糖,可被豬吸收利用,提高了飼料的利用率。請回答下列問題:
(1)若要使β-甘露聚糖酶基因在野生酵母菌細胞中表達,需要通過質(zhì)粒載體連接β-甘露聚糖酶基因,而不能直接將β-露聚糖酶基因?qū)胍吧湍妇毎湓蚴谦@取的β-甘露聚糖酶基因上沒有其表達所需要的 啟動子和終止子啟動子和終止子。
(2)與細胞內(nèi)DNA復制不同,對β-甘露聚糖酶基因進行PCR擴增時,β-甘露聚糖酶基因的解旋是通過 高溫(或90~95℃)高溫(或90~95℃)(填條件)來實現(xiàn)的。PCR技術(shù)擴增β-甘露聚糖酶基因的前提是 要有一段已知β-甘露聚糖酶基因的核苷酸序列要有一段已知β-甘露聚糖酶基因的核苷酸序列,以便合成引物。PCR技術(shù)所利用的原料是 dNTP(或dCTP、dATP、dGTP、dTTP)dNTP(或dCTP、dATP、dGTP、dTTP)。
(3)將β-露聚糖酶基因與質(zhì)粒載體構(gòu)建成基因表達載體的目的是 使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。
(4)用兩種限制性核酸內(nèi)切酶切割質(zhì)粒后,再用DNA連接酶將目的基因與載體通過 磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵(化學鍵)連接起來,構(gòu)建基因表達載體并導入野生酵母菌細胞,利用 DNA分子雜交DNA分子雜交技術(shù)可檢測β-露聚糖酶基因是否導入成功。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】啟動子和終止子;高溫(或90~95℃);要有一段已知β-甘露聚糖酶基因的核苷酸序列;dNTP(或dCTP、dATP、dGTP、dTTP);使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在,并且可以遺傳給下一代,同時使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用;磷酸二酯鍵;DNA分子雜交
【解答】
【點評】
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