透明質(zhì)酸是一種應(yīng)用廣泛的粘性多糖，研究者欲改造枯草芽孢桿菌，通過添加誘導(dǎo)型啟動子來協(xié)調(diào)菌體生長與產(chǎn)物生產(chǎn)之間的關(guān)系。
（1）為通過外源添加誘導(dǎo)劑來控制基因的表達，研究者選擇了含木糖誘導(dǎo)型啟動子的p質(zhì)粒。透明質(zhì)酸合成酶基因H以a鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈，轉(zhuǎn)錄時mRNA自身的延伸方向為5′→3′。為了使圖1中酶切后的H基因按照正確的方向與p質(zhì)粒連接，p質(zhì)粒位點1和2所對應(yīng)的酶分別是

Xho酶和Bsal酶

Xho酶和Bsal酶

。酶切后加入

DNA連接

DNA連接

酶使它們形成重組質(zhì)粒。

（2）為協(xié)調(diào)菌體生長與產(chǎn)物生產(chǎn)之間的關(guān)系，將構(gòu)建好的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入經(jīng)

Ca²⁺/CaCl₂

Ca²⁺/CaCl₂

處理后的枯草芽孢桿菌（D菌），在含

四環(huán)素/抗生素

四環(huán)素/抗生素

的培養(yǎng)基上篩選，得到枯草芽孢桿菌E（E菌）。進行工業(yè)培養(yǎng)時，培養(yǎng)基應(yīng)選擇

C

C

。
A．以木糖為唯一碳源的培養(yǎng)基
B．以蔗糖和木糖混合為碳源的培養(yǎng)基
C．以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基，接種2小時后添加木糖
D．以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基，培養(yǎng)結(jié)束后提取培養(yǎng)液，添加木糖
（3）質(zhì)粒在細菌細胞中遺傳不穩(wěn)定、易丟失，研究者嘗試將重組質(zhì)粒進行改造，利用同源區(qū)段交叉互換的方法將H基因插入枯草芽孢桿菌的基因組mpr位點，得到整合型枯草芽孢桿菌F（F菌）。請在圖2方框中畫出F菌的基因組

。
（4）對三種枯草芽孢桿菌進行培養(yǎng)，結(jié)果如圖3，請選擇適宜工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)的菌種并闡明理由

F菌；F菌比E菌生長迅速，透明質(zhì)酸產(chǎn)量高，培養(yǎng)基中不需要添加四環(huán)素，H基因整合到細菌DNA上，不易丟失

F菌；F菌比E菌生長迅速，透明質(zhì)酸產(chǎn)量高，培養(yǎng)基中不需要添加四環(huán)素，H基因整合到細菌DNA上，不易丟失

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