基因敲除是通過一定的途徑使機體特定的基因失活或缺失，從而使部分功能被屏蔽的技術。來源于λ噬菌體的Red同源重組系統(tǒng)由λ噬菌體的exo、bet、gam3個基因組成，分別編碼EXO、BET、GAM3種蛋白質，可用于大腸桿菌等一系列工程菌的基因敲除。Red同源重組技術要用到質粒pKD46，該質粒含有溫度敏感型的復制起點oriR101，在30℃培養(yǎng)時可以正常復制，而高于37℃時會自動丟失；由ParaB啟動子調控的exo、bet、gam基因，需要L-阿拉伯糖誘導表達。λ-Red系統(tǒng)介導的基因敲除過程如圖所示。請回答下列問題：
（1）EXO為雙鏈核酸外切酶，可以結合在雙鏈DNA的末端，從5′向3′降解DNA單鏈，產(chǎn)生 3'3'（選填“3′或5′”）黏性末端；BET結合在EXO外切產(chǎn)生的末端單鏈上，促進其與受體細胞的靶序列進行同源重組，替換靶基因；GAM蛋白能夠抑制受體細胞內(nèi)核酸外切酶活性，進而 抑制抑制（選填“抑制”或“促進”）受體細胞對外源DNA的降解。
（2）要將pKD46導入大腸桿菌，首先需用Ca2+處理大腸桿菌，目的是 使其處于感受態(tài)使其處于感受態(tài)。為使pKD46在細菌內(nèi)正常復制、Red重組酶正常合成，必需滿足的培養(yǎng)條件是 培養(yǎng)溫度為30℃，培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖培養(yǎng)溫度為30℃，培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖。過程I是用含有青霉素的培養(yǎng)基篩選成功導入了pKD46的大腸桿菌，說明 大腸桿菌不含青霉素抗性基因，pKD46中含青霉素抗性基因大腸桿菌不含青霉素抗性基因，pKD46中含青霉素抗性基因。
（3）用PCR技術擴增卡那霉素抗性基因時，同時需考慮將大腸桿菌基因組DNA上特定靶基因敲除。圖中含HAⅠ的引物由兩部分組成，其中HAⅠ的堿基序列應該與 靶基因外側靶基因外側的堿基序列相同，另一部分應該與 卡那霉素抗性基因卡那霉素抗性基因相應鏈上的堿基互補。
（4）為篩選出同源重組成功的大腸桿菌（靶基因被敲除），過程II使用的培養(yǎng)基必須含有 卡那霉素卡那霉素，然后再通過在 高于37℃高于37℃條件下培養(yǎng)，把質粒pKD46除去。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】3'；抑制；使其處于感受態(tài)；培養(yǎng)溫度為30℃，培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖；大腸桿菌不含青霉素抗性基因，pKD46中含青霉素抗性基因；靶基因外側；卡那霉素抗性基因；卡那霉素；高于37℃
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：22引用：1難度：0.7
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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