安莎霉素是一類主要由海洋來源的稀有放線菌產(chǎn)生的活性大環(huán)內(nèi)酰胺類次級(jí)代謝產(chǎn)物,具有較高的抗菌活性和藥用價(jià)值??蒲腥藛T通常從深海采集淤泥樣本,再分離、純化并篩選出產(chǎn)安莎霉素的放線菌。一株海洋來源的稀有放線菌的分離培養(yǎng)流程如圖1所示。請(qǐng)分析回答下列問題:
(1)過程①的接種方法為 稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法。
(2)統(tǒng)計(jì)菌落種類和數(shù)量時(shí)要每隔24 h觀察統(tǒng)計(jì)一次,直到各類菌落數(shù)目穩(wěn)定,以防止培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致 遺漏菌落的種類和數(shù)目遺漏菌落的種類和數(shù)目,或培養(yǎng)時(shí)間太長(zhǎng)導(dǎo)致 菌落粘連影響計(jì)數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水菌落粘連影響計(jì)數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水。
(3)研究人員發(fā)現(xiàn)產(chǎn)安莎霉素的放線菌具有一個(gè)普遍的共性--氨基酸缺陷型,從培養(yǎng)基成分分析,基本培養(yǎng)基與完全培養(yǎng)基存在差異的成分是 氨基酸氨基酸。為了初步鑒定營(yíng)養(yǎng)缺陷型放線菌菌株,科研人員進(jìn)行了如下操作:
①用接種針挑取 菌落A菌落A(填“菌落A”或“菌落B”)接種于盛有完全液體培養(yǎng)基的離心管中,28℃振蕩培養(yǎng)3~5天后,離心取沉淀物,用無菌水洗滌3次制成菌懸液。
②吸取1 mL菌懸液加入無菌培養(yǎng)皿中,傾注15 mL融化并冷卻至50℃左右的基本培養(yǎng)基,待其冷凝后用記號(hào)筆在 皿底皿底(“皿蓋”或“皿底”)劃分五個(gè)區(qū)域,標(biāo)記A、B、C、D、E。
③在劃分的五個(gè)區(qū)域上放入少量分組的氨基酸粉末(如表所示),經(jīng)培養(yǎng)后,觀察生長(zhǎng)圈出現(xiàn)的區(qū)域,從而確定屬于何種氨基酸缺陷型。
組別 | 所含氨基酸 | ||||
A | 組氨酸 | 蘇氨酸 | 谷氨酸 | 天冬氨酸 | 亮氨酸 |
B | 精氨酸 | 蘇氨酸 | 賴氨酸 | 甲硫氨酸 | 苯丙氨酸 |
C | 酪氨酸 | 谷氨酸 | 賴氨酸 | 色氨酸 | 丙氨酸 |
D | 甘氨酸 | 天冬氨酸 | 甲硫氨酸 | 色氨酸 | 絲氨酸 |
E | 半胱氨酸 | 亮氨酸 | 苯丙氨酸 | 丙氨酸 | 絲氨酸 |
天冬氨酸
天冬氨酸
缺陷型。(4)科研人員分離、純化出產(chǎn)安莎霉素的放線菌后,需要利用PCR技術(shù)大量擴(kuò)增其染色體上的16S rRNA保守片段,然后通過DNA序列比對(duì)進(jìn)行菌種親源關(guān)系的鑒定。
①查找數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)該放線菌的16S rRNA目的基因片段及相應(yīng)限制酶識(shí)別序列如圖2所示:
16S rRNA基因片段
限制酶 | EcoR I | BamH I | HindⅢ | Sac I |
識(shí)別序列和切割位點(diǎn) | GAATTCG | GATCC | AAGCTT | GAGCTC |
EcoRⅠ
EcoRⅠ
和 SacⅠ
SacⅠ
。得到目的基因以后就可以利用PCR技術(shù)對(duì)16S rRNA進(jìn)行體外擴(kuò)增,此過程需要加入 Taq酶
Taq酶
催化。②聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)對(duì)引物的特異性要求較高,放線菌是一類GC含量高的細(xì)菌,設(shè)定退火溫度時(shí)需要適當(dāng)
升高
升高
(填“升高”或“降低”)溫度,為了摸索出最適退火溫度,設(shè)定了55℃、56℃、57℃、58℃四個(gè)溫度梯度,反應(yīng)結(jié)束后,電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物(已知16S rRNA片段大小為1 500 dp),不同溫度對(duì)應(yīng)的結(jié)果如圖3所示,1~4四個(gè)泳道分別對(duì)應(yīng)的退火溫度是 A
A
(填字母)。A.55℃、56℃、57℃、58℃
B.56℃、55℃、58℃、57℃
C.58℃、57℃、56℃、55℃
D.55℃、58℃、56℃、57℃
【考點(diǎn)】微生物的選擇培養(yǎng)(稀釋涂布平板法);基因工程的操作過程綜合.
【答案】稀釋涂布平板法;遺漏菌落的種類和數(shù)目;菌落粘連影響計(jì)數(shù)、培養(yǎng)基表面干燥脫水;氨基酸;菌落A;皿底;天冬氨酸;EcoRⅠ;SacⅠ;Taq酶;升高;A
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:28引用:1難度:0.7
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1.丙草胺(C15H22ClNO2)是一種廣泛應(yīng)用的除草劑,能抑制土壤細(xì)菌、放線菌和真菌的生長(zhǎng)。某研究小組從某地土壤中分離獲得能有效降解丙草胺的細(xì)菌菌株,并對(duì)其計(jì)數(shù)(如圖所示),以期為修復(fù)污染土壤提供微生物資源。下列敘述錯(cuò)誤的是( ?。?br />
發(fā)布:2024/12/31 4:0:1組卷:17引用:3難度:0.7 -
2.回答下列關(guān)于微生物的問題.
阿拉伯膠是一種多糖,研究者從某地合歡樹下距離地表深10~15cm處的土樣中初篩到能合成阿拉伯膠降解酶的菌株SM01,以下為該菌株的鑒定過程.
(1)為獲得單菌落,可采用平板劃線法或
A.細(xì)胞膜 B.核糖體 C.?dāng)M核 D.莢膜
(2)表中培養(yǎng)液pH均為6.0,若對(duì)SM01中阿拉伯膠降解酶的活力進(jìn)行測(cè)定,則應(yīng)選用表中的
①缺少
②具有
③缺乏
表 試驗(yàn)用培養(yǎng)液配方培養(yǎng)液 阿拉伯膠 阿拉伯膠酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4?7H2O KCl FeSO4?7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L發(fā)布:2025/1/2 8:0:1組卷:6引用:1難度:0.5 -
3.為了防治大氣污染,煙氣脫硫是環(huán)保領(lǐng)域迫切需要解決的問題.研究人員為了獲得用于煙氣脫硫的脫硫細(xì)菌,并了解其生長(zhǎng)規(guī)律,進(jìn)行了如下操作.請(qǐng)回答下列問題:
(1)采樣與細(xì)菌的篩選:在某熱電廠煙囪周圍區(qū)域要盡量做到
(2)馴化脫硫細(xì)菌:將篩選出的脫硫細(xì)菌接種于有少量無菌水的三角瓶中,邊攪拌邊持續(xù)通入SO2氣體幾分鐘,然后接種到培養(yǎng)基上,待長(zhǎng)出菌落后再重復(fù)上述步驟,并逐步延長(zhǎng)通SO2的時(shí)間,同時(shí)逐步降低培養(yǎng)基的pH.此操作的目的是分離出
(3)培養(yǎng)與觀察:一般來說,在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、溫度及培養(yǎng)時(shí)間),馴化后的脫硫細(xì)菌表現(xiàn)出穩(wěn)定的
(4)探究生長(zhǎng)規(guī)律:在計(jì)數(shù)時(shí),計(jì)數(shù)方法有稀釋涂布平板法和發(fā)布:2025/1/1 8:0:2組卷:6引用:2難度:0.5
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