重組工程是一項新型的基因操作技術(shù)，其基本原理是通過重組酶將特定的單鏈DNA片段與雙鏈DNA分子在同源序列處重組，從而實現(xiàn)基因的敲除、替換和突變等修飾。圖1表示DNA單鏈重組過程示意圖，請回答問題：
（1）基因工程的核心是在體外構(gòu)建 基因表達載體基因表達載體，該過程中使用的酶是 限制酶和DNA連接限制酶和DNA連接。
（2）圖2是大腸桿菌pBR322-Red質(zhì)粒的示意圖?？蒲腥藛T欲利用重組工程技術(shù)敲除該質(zhì)粒上從kil基因至N基因之間的DNA序列，設(shè)計的單鏈多核苷酸引物應(yīng)為 ①、④①、④的連接序列（在①、②、③、④中選填）。
（3）將單鏈多核苷酸與含有pBR322-Red質(zhì)粒的大腸桿菌感受態(tài)細胞混合、電擊轉(zhuǎn)化，在重組酶的作用下，理論上1%～6%的大腸桿菌會發(fā)生體內(nèi)同源重組。已知線性化質(zhì)粒無法轉(zhuǎn)化大腸桿菌。為了從大腸桿菌混合物中篩選出發(fā)生重組的克隆，科研人員進行了下列操作。請完成表格相關(guān)內(nèi)容。
| 目的 | 簡要操作 |
| 擴大培養(yǎng) | ①將大腸桿菌混合物全部轉(zhuǎn)入含 氨芐青霉素 氨芐青霉素 的液體培養(yǎng)基中 |
| 質(zhì)粒提取、酶切 | ②提取質(zhì)粒，選擇限制酶 XhoXhoⅠ XhoXhoⅠ 進行處理 |
| 轉(zhuǎn)化 | ③用酶切產(chǎn)物轉(zhuǎn)化 不含 不含 （“含有”或“不含有”）pBR322-Red質(zhì)粒大腸桿菌的感受態(tài)細胞 |
| 鑒定、篩選 | ④菌落PCR技術(shù)、瓊脂糖凝膠電泳 |
1
1
（填“1”或“2”）對應(yīng)的是kil-N基因缺失的質(zhì)粒。
（5）常規(guī)的基因工程和重組工程都能將外源基因插入質(zhì)粒。一般情況下，限制酶在質(zhì)粒上存在多個作用位點，因此常規(guī)的基因工程技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒時會出現(xiàn)
目的基因插入位置不準確
目的基因插入位置不準確
現(xiàn)象，而重組工程技術(shù)可以提高精準度。【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因表達載體；限制酶和DNA連接；①、④；氨芐青霉素；XhoXhoⅠ；不含；1；目的基因插入位置不準確
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：79引用：1難度：0.5
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（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
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發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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