研究者將某基因改造并插入質粒中，然后導入大腸桿菌中獲得表達產物。將獲得的突變基因導入普通大腸桿菌之前，先構建基因表達載體。如圖1為所用載體示意圖，表為限制酶的識別序列及切割位點。如圖2為通過PCR定點誘變改造基因的流程圖。請回答下列問題：
（1）構建基因表達載體時，為使目的基因與載體正確連接，在擴增目的基因時，應在其一對引物的5'端分別引入 Pvit2、ECORⅠPvit2、ECORⅠ兩種不同限制酶的識別序列。在目的基因和載體連接時，可選用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶（填“E?coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）。
（2）構建的基因表達載體中需要使用大腸桿菌蛋白基因的啟動子tac,原因是 需要用大腸桿菌蛋白基因的啟動子，使目的基因在大腸桿菌內特異性表達需要用大腸桿菌蛋白基因的啟動子，使目的基因在大腸桿菌內特異性表達。將受體菌置于含有 氨芐青霉素氨芐青霉素的培養(yǎng)基中進行篩選培養(yǎng)，以獲得能表達基因產物的細菌。
（3）利用大引物PCR進行定點誘變需要進行兩輪PCR，PCR過程中需要 耐高溫的DNA聚合耐高溫的DNA聚合酶。在第一次PCR中，至少需要 22個循環(huán)才能獲得相應的大引物模板。利用所獲得的大引物模板和其他引物進行第二次PCR過程，要獲得帶有誘變點的改良基因，引物應選用大引物兩條鏈中的 ②②（填“①”或“②”）。與X射線誘變相比，該突變技術的優(yōu)點是 目的性強、定向突變、突變頻率高等目的性強、定向突變、突變頻率高等。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】Pvit2、ECORⅠ；T4DNA連接酶；需要用大腸桿菌蛋白基因的啟動子，使目的基因在大腸桿菌內特異性表達；氨芐青霉素；耐高溫的DNA聚合；2；②；目的性強、定向突變、突變頻率高等
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/5/15 8:0:8組卷：7引用：1難度：0.5
相似題
-
1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7