某種病毒的N蛋白（刺突蛋白）可與宿主細(xì)胞的受體結(jié)合，是決定病毒入侵易感細(xì)胞的關(guān)鍵蛋白。下表是兩種針對(duì)該病毒的疫苗研發(fā)的技術(shù)路線，請(qǐng)回答相關(guān)問(wèn)題：
| 方法 | 技術(shù)路線 |
| 基因工程疫苗 | N蛋白基因→基因表達(dá)載體→大腸桿菌→N蛋白→人體 |
| 腺病毒載體重組疫苗 | N蛋白基因→腺病毒基因表達(dá)載體人體 |
使雙鏈DNA解聚為單鏈
使雙鏈DNA解聚為單鏈
。（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體的過(guò)程中，需要用兩種不同的限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，目的是防止
目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化
目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化
以及目的基因和質(zhì)粒反向連接。構(gòu)建的基因表達(dá)載體上需要有啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因
標(biāo)記基因
等結(jié)構(gòu)。將基因表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌，首先用 鈣離子（Ca2+）
鈣離子（Ca2+）
處理大腸桿菌細(xì)胞，使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中 DNA分子的生理狀態(tài)。（3）基因工程疫苗制備過(guò)程中需要分離和提純大腸桿菌。通常情況下需要對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行
高壓蒸汽（濕熱）
高壓蒸汽（濕熱）
滅菌。當(dāng)采用平板劃線法分離大腸桿菌時(shí)，第二次及以后的劃線都要從上一次劃線的末端開始，其目的是 使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而減少，最終得到有單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落
使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而減少，最終得到有單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落
。（4）制作腺病毒載體重組疫苗時(shí)需要將腺病毒的毒力相關(guān)基因除掉，刪除基因時(shí)需用到
限制
限制
酶，這種酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的 磷酸二酯
磷酸二酯
鍵斷開。與基因工程疫苗相比，腺病毒載體重組疫苗的優(yōu)點(diǎn)是能持續(xù)表達(dá)抗原，使人體免疫應(yīng)答更持久。【答案】使雙鏈DNA解聚為單鏈；目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化；標(biāo)記基因；鈣離子（Ca2+）；高壓蒸汽（濕熱）；使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而減少，最終得到有單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落；限制；磷酸二酯
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：35引用：2難度：0.7
相似題
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1．基因編輯是指將外源DNA片段導(dǎo)入染色體DNA特定位點(diǎn)或刪除基因內(nèi)部片段，定點(diǎn)改造基因，獲得預(yù)期的生物體基因序列發(fā)生改變的技術(shù)。如圖是對(duì)某生物B基因進(jìn)行基因編輯的過(guò)程，該過(guò)程中用sgRNA指引內(nèi)切核酸酶Cas9結(jié)合到特定的靶位點(diǎn)。下列分析不合理的是（ ?。?/h2>發(fā)布：2024/12/30 21:30:1組卷：4引用：2難度：0.7 -
2．人類基因組計(jì)劃測(cè)定了人體的24條染色體，這24條染色體是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 0:30:1組卷：112引用：7難度：0.7 -
3．學(xué)習(xí)以下材料，回答（1）～（4）題。
利用抑制性tRNA進(jìn)行無(wú)義突變遺傳病的治療
無(wú)義突變是由于某個(gè)堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子（UAA、UAG或UGA），從而使肽鏈合成提前終止，造成蛋白質(zhì)的功能改變，引發(fā)相關(guān)疾病。約有10%～15%的人類基因相關(guān)遺傳疾病是由無(wú)義突變引發(fā)的。常規(guī)的基因治療是將正?；虻腸DNA序列或是有治療價(jià)值的基因（如CRISPR-Cas9相關(guān)的基因編輯工具）通過(guò)一定的方式導(dǎo)入人體靶細(xì)胞內(nèi)，達(dá)到替代或修復(fù)缺陷基因、治療疾病的目的。導(dǎo)入基因插入位置不當(dāng)、過(guò)高或過(guò)低表達(dá)，都可能會(huì)導(dǎo)致副作用。盡管基因編輯可以實(shí)現(xiàn)生理水平的基因表達(dá)，但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發(fā)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)仍然是巨大的挑戰(zhàn)。
抑制性tRNA（sup-tRNA）由天然tRNA改造而來(lái)，它的反密碼子通過(guò)堿基配對(duì)原則可以識(shí)別無(wú)義突變的終止密碼子，使得mRNA在翻譯至無(wú)義突變位點(diǎn)時(shí)不啟動(dòng)翻譯終止而是繼續(xù)向后進(jìn)行翻譯，獲得有功能的全長(zhǎng)蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因，是相關(guān)基因發(fā)生無(wú)義突變，產(chǎn)生終止密碼子UAG。研究者構(gòu)建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體（圖1），以及針對(duì)該無(wú)義突變?cè)O(shè)計(jì)的sup-tRNA表達(dá)載體（產(chǎn)生的sup-tRNA能夠識(shí)別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡(jiǎn)寫作sup-tRNATyr），將其導(dǎo)入細(xì)胞進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)與具有相似作用的化合物G418比較，sup--tRNA的作用更加顯著（圖2）；進(jìn)一步利用重組腺相關(guān)病毒作為載體將sup-tRNA導(dǎo)入患病小鼠模型中，實(shí)驗(yàn)顯示能夠降低黏多糖過(guò)度積存，實(shí)現(xiàn)對(duì)該病癥的有效治療，其療效可以持續(xù)半年以上。
從整體來(lái)看，G418在促進(jìn)跨越無(wú)義突變位點(diǎn)繼續(xù)翻譯時(shí)引入的氨基酸較為隨機(jī)，而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一，且不會(huì)影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài)，所以sup-tRNA在個(gè)體治療中具有很高的安全性，因而在未來(lái)基因突變引起的疾病相關(guān)治療中具有非常大的應(yīng)用前景。
（1）侵染時(shí)，作為載體的重組腺相關(guān)病毒與靶細(xì)胞膜上的發(fā)生識(shí)別，引發(fā)內(nèi)吞，進(jìn)入細(xì)胞后釋放單鏈DNA作為模板，利用宿主細(xì)胞的催化合成其互補(bǔ)DNA鏈，再經(jīng)過(guò)過(guò)程產(chǎn)生sup-tRNA。
（2）除了引入的氨基酸較為單一，不影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài)，我們還可推斷，用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處（填“能”或“不能”）繼續(xù)往后翻譯，具有很高的安全性。
（3）研究者構(gòu)建mldua突變基因和Flag基因融合的載體，目的是通過(guò)檢測(cè)來(lái)確定是否跨越無(wú)義突變位點(diǎn)繼續(xù)向后翻譯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，相比于化合物G418，sup-tRNA在促進(jìn)無(wú)義突變位點(diǎn)的翻譯方面更加有效，支持這一結(jié)論的依據(jù)是：。
（4）有文獻(xiàn)報(bào)道，已在近1000個(gè)不同的人類基因中發(fā)現(xiàn)了7500多個(gè)無(wú)義突變。常規(guī)的基因治療需要為每種疾病設(shè)計(jì)獨(dú)特的治療策略，這將是一項(xiàng)耗費(fèi)驚人的項(xiàng)目。據(jù)此說(shuō)明sup-tRNA的應(yīng)用價(jià)值。發(fā)布：2025/1/3 8:0:1組卷：26引用：1難度：0.6
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