某動物體內(nèi)含有研究者感興趣的目的基因，研究者欲將該基因?qū)氪竽c桿菌的質(zhì)粒中保存。該質(zhì)粒含有氨芐青霉素抗性基因（Amp^R基因）、LacZ基因及一些酶切位點，其結(jié)構(gòu)和簡單的操作步驟如圖所示。請根據(jù)以上信息回答下列問題。

（1）在第②步中，應(yīng)選擇用

相同

相同

（相同/不同）的限制酶或切割能產(chǎn)生相同末端的限制酶切割質(zhì)粒和含有目的基因的DNA片段。限制酶的切割位點 

不能

不能

（能/不能）位于目的基因的內(nèi)部，限制酶  

不能

不能

（能/不能）破壞質(zhì)粒的啟動子、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點等結(jié)構(gòu)。
（2）在第③步中，為了使質(zhì)粒DNA與目的基因能連接，還需要在混合物中加入

DNA連接酶

DNA連接酶

（限制酶/DNA連接酶）。
（3）選用含有Amp^R基因和LacZ基因的質(zhì)粒的原因：

Amp^R基因

Amp^R基因

（Amp^R基因/LacZ基因）可用于檢測質(zhì)粒是否導(dǎo)入了大腸桿菌。由于LacZ基因的效應(yīng)，這些生長的菌落可能出現(xiàn)兩種顏色：含有空質(zhì)粒（沒有連接目的基因的質(zhì)粒）的大腸桿菌菌落呈

藍色

藍色

（藍色/白色）；含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落呈

白色

白色

（藍色/白色）。
（4）含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落呈白色的原因：目的基因的插入破壞了 LacZ基因的結(jié)構(gòu)，使其不能正常表達形成

β-半乳糖苷酶

β-半乳糖苷酶

，底物 X-gal也就不會被分解。