環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP），因操作簡便，能快速、精確地進(jìn)行基因擴(kuò)增而得到廣泛的應(yīng)用。LAMP使用的酶是有鏈置換效應(yīng)的Bst DNA聚合酶，其原理如圖1所示，請(qǐng)回答下列問題：
（1）LAMP技術(shù)溫度控制在63℃左右，與常規(guī)PCR相比，其簡化之處是不需要 變性、復(fù)性、延伸過程的循環(huán)（或溫度循環(huán)）變性、復(fù)性、延伸過程的循環(huán)（或溫度循環(huán)）；另一個(gè)簡化之處是通過肉眼觀察有無白色沉淀焦磷酸鎂即可判斷靶基因是否復(fù)制，推測(cè)其中的焦磷酸來自 dNTPdNTP水解。
（2）如圖1，針對(duì)靶基因上的6個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)了4條引物，其中決定主要產(chǎn)物長度的是 2條內(nèi)部引物（或FIP、BIP）2條內(nèi)部引物（或FIP、BIP），由引物F3延伸出子鏈的作用是 促進(jìn)鏈置換，增加模板數(shù)量促進(jìn)鏈置換，增加模板數(shù)量。部分單鏈DNA兩端成環(huán)狀，環(huán)狀結(jié)構(gòu)中局部雙鏈的形成依賴 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則。
（3）將LAMP技術(shù)用于獼猴桃褪綠環(huán)斑相關(guān)病毒（AcCRaV）的核酸檢測(cè)，為找到最適宜的靶序列擴(kuò)增溫度，研究者設(shè)定56-63℃溫度梯度，并進(jìn)行染色、電泳等操作后，得到如圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果。據(jù)圖可知，此靶序列最佳擴(kuò)增的溫度為 6262℃，電泳后出現(xiàn)梯形條帶，該結(jié)果說明 LAMP技術(shù)擴(kuò)增得到的DNA不等長LAMP技術(shù)擴(kuò)增得到的DNA不等長。
（4）將LAMP技術(shù)用于新冠病毒（SARS-CoV-2）的核酸檢測(cè)，先要進(jìn)行如下操作：
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 簡要操作過程 |
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采集樣本 采集樣本
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用醫(yī)用棉簽從上呼吸道采集咽拭子或鼻拭子，然后低溫封存并送檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行檢測(cè) |
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提取RNA 提取RNA
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向樣本中加入Trizol裂解蛋白質(zhì)成分，再加入氯仿并離心，吸取上層水相置于新的EP離心管中，加入等體積的異丙醇，離心棄上清液，加入乙醇洗滌，離心棄上清液，晾干后加入DEPC水解液破壞RNA水解酶。 |
| 合成cDNA | 向樣本中加入緩沖液、 逆轉(zhuǎn)錄酶、引物 逆轉(zhuǎn)錄酶、引物 和dNTP，在PCR儀中獲得cDNA產(chǎn)物。 |
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；目的基因的篩選與獲取．
【答案】變性、復(fù)性、延伸過程的循環(huán)（或溫度循環(huán)）；dNTP；2條內(nèi)部引物（或FIP、BIP）；促進(jìn)鏈置換，增加模板數(shù)量；堿基互補(bǔ)配對(duì)；62；LAMP技術(shù)擴(kuò)增得到的DNA不等長；采集樣本；提取RNA；逆轉(zhuǎn)錄酶、引物
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：17引用：1難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過程中Rubiaco酶對(duì)CO2的親和力，利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問題：
（1）PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）?？衫枚c(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個(gè)目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個(gè)引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為?？蒲腥藛T通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測(cè)外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克?。梢垣@得多個(gè)具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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