科研人員利用基因工程構(gòu)建了超量表達(dá)蛋白的轉(zhuǎn)基因玉米。在超量表達(dá)X基因載體的構(gòu)建中，所用的含目的基因的DNA片段和根瘤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的酶切位點如圖1所示，其中強啟動子具有結(jié)合RNA聚合酶且能多次啟動轉(zhuǎn)錄的功能；X蛋白在不同玉米株系的表達(dá)量如圖2所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）為使X基因在玉米植株中超量表達(dá)，應(yīng)優(yōu)先選用

BamHⅠ和SacⅠ

BamHⅠ和SacⅠ

酶組合，將目的基因片段插入T-DNA區(qū)段，其中T-DNA的作用是

T-DNA可以將強啟動子和X基因帶入玉米細(xì)胞并整合到玉米細(xì)胞染色體DNA上

T-DNA可以將強啟動子和X基因帶入玉米細(xì)胞并整合到玉米細(xì)胞染色體DNA上

。
（2）可在農(nóng)桿菌培養(yǎng)基中加入卡那霉素以篩選

成功導(dǎo)入超量表達(dá)X基因載體

成功導(dǎo)入超量表達(dá)X基因載體

的農(nóng)桿菌，得到的農(nóng)桿菌與玉米愈傷組織混合培養(yǎng)，在接下來的篩選過程中，除了以X基因為模板設(shè)計探針進(jìn)行DNA分子雜交外，還可以通過

在培養(yǎng)基中添加潮霉素/以X基因為模板設(shè)計探針與X基因mRNA雜交/以X蛋白為抗體，獲得特異性抗原探針，以愈傷組織表達(dá)的X蛋白雜交

在培養(yǎng)基中添加潮霉素/以X基因為模板設(shè)計探針與X基因mRNA雜交/以X蛋白為抗體，獲得特異性抗原探針，以愈傷組織表達(dá)的X蛋白雜交

鑒別導(dǎo)入T-DNA序列的愈傷組織。
（3）篩選出的愈傷組織經(jīng)過誘導(dǎo)，分化成

芽和根的分生組織（叢狀苗或幼苗）

芽和根的分生組織（叢狀苗或幼苗）

，最終獲得多個轉(zhuǎn)基因玉米株系。在誘導(dǎo)形成愈傷組織和愈傷組織再分化形成植株過程需要更換新的培養(yǎng)基，原因是：

這兩個過程所需的營養(yǎng)物質(zhì)和植物生長調(diào)節(jié)劑配比不同

這兩個過程所需的營養(yǎng)物質(zhì)和植物生長調(diào)節(jié)劑配比不同

。待生根后，將苗移栽至蛭石中，逐漸

降低環(huán)境濕度

降低環(huán)境濕度

進(jìn)行煉苗。
（4）不同轉(zhuǎn)基因玉米株系中X蛋白表達(dá)量差異性可能與

目的基因在染色體上的插入次數(shù)/目的基因在染色體上的插入位置/強啟動子是否丟失/受體RNA聚合酶表達(dá)量差異/目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞

目的基因在染色體上的插入次數(shù)/目的基因在染色體上的插入位置/強啟動子是否丟失/受體RNA聚合酶表達(dá)量差異/目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞

有關(guān)。（答出兩點即可）