抗除草劑轉基因作物的推廣可有效減輕除草勞動強度、提高農(nóng)業(yè)生產(chǎn)效率。圖1為抗除草劑轉基因玉米的技術流程。
（1）構建含除草劑抗性基因的表達載體，傳統(tǒng)的方法是目的基因通過酶與載體進行重組。載體上目的基因插入位點的限制酶識別序列 不能不能（填“能“或“不能“）出現(xiàn)在目的基因內(nèi)部，可通過 PCRPCR技術在目的基因兩側添加相應限制酶識別序列，以便構建表達載體。
（2）為了減少限制酶識別序列的影響，科研人員研發(fā)了新的DNA重組方法：無縫克隆In-Fusion技術（圖2），其中In-Fusion酶可以將任何具有相同15bp末端序列的線性DNA分子進行連接，類似同源重組。
①科研人員希望應用以上方法構建含有A和GUS基因的正組DNA分子，首先獲得了3種DNA分子如圖3，然后混合進行In-Fusion反應。如果引物2上額外添加的片段對應于GUS基因中加粗的e片段，那么引物1和引物4上額外增加的片段分別對應載體中的片段 a、da、d。完成重組反應后，將產(chǎn)物表達載體加入經(jīng)過處理的農(nóng)桿菌中。
②為篩選成功轉入目標重組DNA分子的菌落，可以選取引物 1、41、4擴增目的基因并電泳檢測。請在圖4中畫出陽性菌落的電泳結果。
（3）農(nóng)桿菌轉化愈傷組織時，用含 除草劑除草劑的選擇培養(yǎng)基篩選轉化的愈傷組織。轉化過程中，愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，導致未轉化愈傷組織（假陽性）也可能在選擇培養(yǎng)基上生長。已知報告基因GUS表達產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍色，請敘述排除假陽性的原理。 用無色物質(zhì)K處理愈傷組織，呈現(xiàn)藍色的就是轉化成功的愈傷組織用無色物質(zhì)K處理愈傷組織，呈現(xiàn)藍色的就是轉化成功的愈傷組織。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】不能；PCR；a、d；1、4；除草劑；用無色物質(zhì)K處理愈傷組織，呈現(xiàn)藍色的就是轉化成功的愈傷組織
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.6
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質(zhì)工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6