HSV-1是單純皰疹病毒的一種類型，HSV-1病毒顆粒的組裝主要由包裝信號(hào)序列（a′）介導(dǎo)?？蒲腥藛T從HSV-1基因組中分離出a′，利用基因工程技術(shù)構(gòu)建了質(zhì)粒pHSL并進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)，流程如圖1。請(qǐng)回答下列問題。

注：LacZ的表達(dá)產(chǎn)物β-半乳糖苷酶能將無色化合物X-gal水解產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)而使細(xì)胞變藍(lán)
（1）過程①先用

限制

限制

酶將HSV-1的DNA酶解成若干片段，再利用

（核酸）探針

（核酸）探針

與含有a′的酶解片段進(jìn)行雜交，根據(jù)陽性信號(hào)逐步篩選出盡可能短的a′所在片段。
（2）過程②中使用的限制酶是

XbaⅠ和SacⅠ

XbaⅠ和SacⅠ

。過程③采用的方法是

Ca²⁺處理

Ca²⁺處理

。過程④在轉(zhuǎn)染、培養(yǎng)Vero細(xì)胞時(shí)，常在培養(yǎng)液中添加動(dòng)物血清，其目的是

補(bǔ)充細(xì)胞所需的未知成分

補(bǔ)充細(xì)胞所需的未知成分

。
（3）tsK株是具有感染性的HSV-1溫度敏感株。在tsK株的輔助下，pHSL能組裝成假病毒（不含完整病毒基因組的顆粒），從而獲得tsK株和含假病毒的混合毒株。圖2是Vero細(xì)胞連續(xù)傳代過程中，混合毒株的滴度（代表單位體積液體中病毒顆粒的多少）變化曲線及每代中假病毒的占比（柱形圖）。
①研究中，選用

P6

P6

代混合毒株用于后續(xù)神經(jīng)細(xì)胞的接種實(shí)驗(yàn)可減少tsK株可能造成的細(xì)胞毒性，理由是

P6代混合病毒中tsK株滴度最低，假病毒顆粒的比例最高

P6代混合病毒中tsK株滴度最低，假病毒顆粒的比例最高

。
②為驗(yàn)證假病毒能否感染體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞并表達(dá)LacZ基因，科研人員將混合毒株與大鼠神經(jīng)細(xì)胞按一定比例在

37

37

℃下混合培養(yǎng)48h,用含

X-gal

X-gal

（物質(zhì)）的檢測(cè)液檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大約20%的細(xì)胞變藍(lán)，說明

假病毒能感染神經(jīng)細(xì)胞，將外源基因LacZ導(dǎo)入并表達(dá)

假病毒能感染神經(jīng)細(xì)胞，將外源基因LacZ導(dǎo)入并表達(dá)

。