T—DNA插入失活技術(shù)是目前使用最為廣泛的植物基因敲除手段，該技術(shù)利用農(nóng)桿菌T—DNA介導(dǎo)轉(zhuǎn)化，將一段帶有報告基因的DNA序列整合到植物基因組DNA上，如果這段DNA插入到靶基因（待敲除基因）內(nèi)部或附近，就會導(dǎo)致靶基因失活?；卮鹣铝袉栴}：
（1）轉(zhuǎn)化是指 目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程。使用T—DNA介導(dǎo)轉(zhuǎn)化的原因是 T—DNA能轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并整合到該細(xì)胞的染色體DNA上T—DNA能轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并整合到該細(xì)胞的染色體DNA上。
（2）T—DNA在植物基因組中會發(fā)生隨機整合，可利用PCR技術(shù)進(jìn)行鑒定。圖1為靶基因（共900bp）部分堿基序列，經(jīng)基因敲除處理后得到的三種植株的靶基因PCR擴增產(chǎn)物的電泳結(jié)果如圖2。
①PCR時應(yīng)加入依據(jù)靶基因序列設(shè)計的兩種引物，請寫出引物的序列 GACCTG、CAATCCGACCTG、CAATCC（每個序列寫出6個堿基即可）。除上述兩種引物外還應(yīng)加入依據(jù) 報告基因報告基因序列設(shè)計的一種引物，目的是 確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中。
②已知目標(biāo)植物為二倍體，分析出現(xiàn)圖2中B種情況的原因是 將一對靶基因中的一個基因敲除將一對靶基因中的一個基因敲除。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程；T—DNA能轉(zhuǎn)移到被侵染的細(xì)胞，并整合到該細(xì)胞的染色體DNA上；GACCTG、CAATCC；報告基因；確定含報告基因的DNA序列是否插入到靶基因中；將一對靶基因中的一個基因敲除
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.7
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1．以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù)，其中說法正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/15 16:30:6組卷：5引用：1難度：0.5 -
2．科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因（SLA-2基因），構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體，進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實驗的主要流程如圖1，SLA-2基因長度為1100bp,質(zhì)粒B的總長度為4445bp,其限制酶切點后的數(shù)字表示距復(fù)制原點的距離。請回答：
（1）過程①中，PCR擴增SLA-2的原理是限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ 識別序列及切割位點 T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC ，下列4種引物中應(yīng)選擇的是。
a 5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
b 5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
c 5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
d 5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
（2）過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是，該過程需要用處理大腸桿菌，使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有（抗生素）的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
（3）若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳，請在答題紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
（4）科研中常用呤霉素對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選，一般選擇最低致死濃度的前一個濃度作為篩選濃度的原因是：既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會讓。實驗結(jié)果如圖2，根據(jù)實驗結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為。
（5）過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽，其原理是，單克隆抗體能檢測其是否具有正確的，從而是否具有生物活性。
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：42引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于“DNA片段的擴增及電泳鑒定”的實驗，說法錯誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/15 6:30:1組卷：3引用：1難度：0.6
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