“藍(lán)白斑篩選”是一種基于質(zhì)粒載體的DNA重組技術(shù)，它可通過改變質(zhì)粒載體中的DNA序列，實(shí)現(xiàn)對菌落顏色的調(diào)控，如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：

	氨芐青霉素
未導(dǎo)入質(zhì)粒	×
導(dǎo)入空白質(zhì)粒	√藍(lán)色菌落
導(dǎo)入重組質(zhì)粒	√白色菌落

（1）將外源DNA片段與質(zhì)粒連接成重組質(zhì)粒時，所用的酶催化形成的化學(xué)鍵是

磷酸二酯鍵

磷酸二酯鍵

。該重組質(zhì)粒除具有外源DNA、標(biāo)記基因外，還具有的結(jié)構(gòu)有復(fù)制原點(diǎn)、

啟動子

啟動子

、終止子等。
（2）將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌前，需在低溫、低濃度的

Ca²⁺

Ca²⁺

溶液中處理大腸桿菌，目的是

使大腸桿菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)（使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)）

使大腸桿菌細(xì)胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)（使大腸桿菌細(xì)胞處于感受態(tài)）

。在轉(zhuǎn)化過程中，實(shí)際轉(zhuǎn)化效率介于50%～85.7%，推測原因可能與

重組質(zhì)粒的濃度、反應(yīng)時間、受體菌的生理狀態(tài)和濃度等

重組質(zhì)粒的濃度、反應(yīng)時間、受體菌的生理狀態(tài)和濃度等

（答兩點(diǎn)）有關(guān)。
（3）在篩選導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌時，培養(yǎng)基中應(yīng)加入

氨芐青霉素、X-Gal

氨芐青霉素、X-Gal

。培養(yǎng)一段時間的平板上，含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌落呈白色的原因是

外源DNA破壞了LacZ基因的結(jié)構(gòu)，使其無法表達(dá)產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中無色的X-Gal不能被分解

外源DNA破壞了LacZ基因的結(jié)構(gòu)，使其無法表達(dá)產(chǎn)生β-半乳糖苷酶，培養(yǎng)基中無色的X-Gal不能被分解

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