重疊延伸PCR技術(shù)是采用具有互補(bǔ)末端的引物，使PCR產(chǎn)物形成了重疊鏈，從而在隨后的擴(kuò)增反應(yīng)中通過(guò)重疊鏈的延伸，將不同來(lái)源的擴(kuò)增片段重疊拼接起來(lái)的技術(shù)，可通過(guò)定點(diǎn)誘變?cè)隗w外改造DNA分子，并將改造后的目的基因?qū)胭|(zhì)粒構(gòu)建目的基因表達(dá)載體。
（1）如圖所示的重疊延伸PCR技術(shù)中，PCR1的引物是 引物A、引物C引物A、引物C。PCR4可獲得大量定點(diǎn)誘變目的基因，此時(shí)的引物為 引物C、引物D引物C、引物D。PCR3時(shí)模板DNA不能選擇DNA分子③的原因是 子鏈的延伸方向只能從5’→3'，以DNA分子③作模板時(shí)子鏈不能延伸子鏈的延伸方向只能從5’→3'，以DNA分子③作模板時(shí)子鏈不能延伸。
（2）為使重疊延伸PCR技術(shù)改造后的目的基因（該基因序列不含圖中限制酶的識(shí)別序列）能與載體正確連接，PCR4時(shí)，應(yīng)在基因上、下游引物的 5′5′端分別添加限制酶 KpnⅠ、EcoRⅠKpnⅠ、EcoRⅠ的酶切位點(diǎn)。
（3）將目的基因、質(zhì)粒及大腸桿菌混合，溫育一段時(shí)間后涂在含四環(huán)素的平板上培養(yǎng)，一段時(shí)間后平板上長(zhǎng)出菌落。這些菌落的菌體內(nèi) 不一定不一定（填“一定”、“不一定”）含有目的基因，理由是 含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長(zhǎng)含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長(zhǎng)。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】引物A、引物C；引物C、引物D；子鏈的延伸方向只能從5’→3'，以DNA分子③作模板時(shí)子鏈不能延伸；5′；KpnⅠ、EcoRⅠ；不一定；含有空白質(zhì)粒的大腸桿菌也能在該培養(yǎng)上生長(zhǎng)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書(shū)面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：45引用：2難度：0.7
相似題
-
1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過(guò)的兩個(gè)過(guò)程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
把好題分享給你的好友吧~~