CRISPR/Cas9是一種高效的基因編輯技術，Cas9基因表達的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在單鏈向導RNA（SgRNA）引導下，切割DNA雙鏈以敲除目標基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因編輯技術的工作原理如圖所示。
回答下列問題。
（1）過程①中，為構建CRISPR/Cas9重組質粒，需對含有特定sgRNA編碼序列的DNA進行酶切處理，然后將其插入到經相同酶切處理過的質粒上，插入時所需要的酶是 DNA連接酶DNA連接酶。
（2）過程②中，將重組質粒導入大腸桿菌細胞的方法是 感受態(tài)細胞法感受態(tài)細胞法。
（3）過程③～⑤中，SgRNA與Cas9蛋白形成復合體，該復合體中的SgRNA可識別并與目標DNA序列特異性結合，二者結合所遵循的原則是 堿基互補配對原則堿基互補配對原則。隨后，Cas9蛋白可切割 目標DNA特定的核苷酸目標DNA特定的核苷酸序列。
（4）利用CRISPR/Cas9基因編輯技術敲除一個長度為1200bp的基因，在DNA水平上判斷基因敲除是否成功所采用的方法是 DNA分子雜交技術DNA分子雜交技術，基因敲除成功的判斷依據是 出現雜交帶出現雜交帶。
（5）某種蛋白酶可高效降解羽毛中的角蛋白?？蒲腥藛T將該蛋白酶基因插入到CRISPR/Cas9質粒中獲得重組質粒，隨后將其導入到大腸桿菌細胞，通過基因編輯把該蛋白酶基因插入到基因組DNA中，構建得到能大量分泌該蛋白酶的工程菌。據圖簡述CRISPR/Cas9重組質粒在受體細胞內，將該蛋白酶基因插入到基因組DNA的編輯過程：CRISPR/Cas9重組質粒在受體細胞內進行轉錄和表達，轉錄的產物是SgRNA，表達的產物是Cas9蛋白，二者形成復合體，該復合體中的SgRNA可識別并與目標DNA序列特異性結合，從而插入到基因組DNA中CRISPR/Cas9重組質粒在受體細胞內進行轉錄和表達，轉錄的產物是SgRNA，表達的產物是Cas9蛋白，二者形成復合體，該復合體中的SgRNA可識別并與目標DNA序列特異性結合，從而插入到基因組DNA中。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA連接酶；感受態(tài)細胞法；堿基互補配對原則；目標DNA特定的核苷酸；DNA分子雜交技術；出現雜交帶；CRISPR/Cas9重組質粒在受體細胞內進行轉錄和表達，轉錄的產物是SgRNA，表達的產物是Cas9蛋白，二者形成復合體，該復合體中的SgRNA可識別并與目標DNA序列特異性結合，從而插入到基因組DNA中
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：275引用：2難度：0.7
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