目前基因工程所用的質(zhì)粒載體主要是以天然細(xì)菌質(zhì)粒的各種元件為基礎(chǔ)重新組建的人工質(zhì)粒，pBR322質(zhì)粒是較早構(gòu)建的質(zhì)粒載體，其主要結(jié)構(gòu)如圖所示。
（1）構(gòu)建人工質(zhì)粒時(shí)要有抗性基因，以便于 篩選（鑒別）目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞篩選（鑒別）目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。
（2）pBR322分子中有單個(gè)EcoRⅠ限制酶作用位點(diǎn)，EcoRⅠ只能識(shí)別序列—GAATTC—，并只能在G和A之間切割。若在某目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)EcoRⅠ的切點(diǎn)，請(qǐng)畫(huà)出目的基因兩側(cè)被限制酶EcoRⅠ切割后所形成的黏性末端：
。
（3）pBR322分子中另有單個(gè)的BamHⅠ限制酶作用位點(diǎn)，現(xiàn)將經(jīng)BamHⅠ處理后的質(zhì)粒與用另一種限制酶BglⅡ處理得到的目的基因，通過(guò)DNA連接酶作用恢復(fù) 磷酸二酯磷酸二酯鍵，成功獲得了重組質(zhì)粒的原因是 兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同。
（4）為了檢測(cè)上述重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入原本無(wú)Ampr和Tetr的大腸桿菌，將大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖二的菌落。再將滅菌絨布按到培養(yǎng)基上，使絨布面沾上菌落，然后將絨布按到含四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到如圖三的結(jié)果（空圈表示與圖二對(duì)照無(wú)菌落的位置）。與圖三空圈相對(duì)應(yīng)的圖二中的菌落表現(xiàn)型是 能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素，圖三結(jié)果顯示，多數(shù)大腸桿菌導(dǎo)入的是 pBR322質(zhì)粒pBR322質(zhì)粒。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】篩選（鑒別）目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；；磷酸二酯；兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同；能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素；pBR322質(zhì)粒
；磷酸二酯；兩種限制酶（BamHⅠ和BglⅡ）切割得到的黏性末端相同；能抗氨芐青霉素，但不能抗四環(huán)素；pBR322質(zhì)粒【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/8/8 8:0:9組卷：36引用：4難度：0.6
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過(guò)程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過(guò)程（填序號(hào)）。過(guò)程②③采用的方法是。
（4）⑤過(guò)程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過(guò)程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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