雞干擾素是一種具有高效和廣譜抗病毒作用的細胞因子，廣泛用于動物領(lǐng)域的抗病毒治療。科研人員將雞干擾素基因作為目的基因，構(gòu)建基因表達載體，通過農(nóng)桿菌介導法導入煙草，以獲得抗病毒煙草。如圖為科研人員制備能合成雞干擾素的煙草愈傷組織細胞的流程，①～④表示相關(guān)的操作，兩種限制酶的識別序列及切割位點如表所示。請回答下列問題：
| 限制酶 | 識別序列和切割位點 |
| EcoRⅠ |  |
| BamHⅠ |
|
雞干擾素基因兩端的部分核苷酸序列
雞干擾素基因兩端的部分核苷酸序列
。科研人員還在兩種引物的一端分別加上了 GAATTC
GAATTC
和 GGATCC
GGATCC
序列，以便于后續(xù)的剪切和連接。為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建表達載體需用兩種限制酶，選擇的原則是 AC
AC
。A．Ti質(zhì)粒內(nèi)，每種限制酶只有一個切割位點
B．目的基因編碼蛋白質(zhì)的序列中，每種限制酶只有一個切割位點
C．酶切后，目的基因形成的兩個黏性末端序列不相同
D．酶切后，Ti質(zhì)粒形成的兩個黏性末端序列相同
（2）步驟②所構(gòu)建的基因表達載體中未標注出的必需元件還有
復制原點
復制原點
，步驟③中需先用 Ca2+
Ca2+
處理農(nóng)桿菌以便將基因表達載體導入細胞。（3）步驟④中，科研人員提取愈傷組織細胞的RNA后，先通過
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
獲得DNA，再進行PCR擴增，若最終未能檢測出干擾素基因，其可能原因是 雞干擾素基因未能導入煙草愈傷組織細胞或?qū)霟煵萦鷤M織細胞的雞干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄
雞干擾素基因未能導入煙草愈傷組織細胞或?qū)霟煵萦鷤M織細胞的雞干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄
。（4）用煙草花葉病毒對獲得的轉(zhuǎn)基因煙草和普通煙草進行接種實驗，接種后第19天對照組植株進入病情指數(shù)（植物受病毒侵染的嚴重程度）為100的平臺期，而轉(zhuǎn)基因植株在第
22
22
天才進入平臺期，但此時的病情指數(shù)為79．說明轉(zhuǎn)基因煙草植株對病毒的侵染表現(xiàn)出一定的抗性，但抗性較低，可能的原因有 實驗得到的干擾素表達量較低，未能很好啟動機體產(chǎn)生抗性或病毒接種量過大，相對來說干擾素誘導調(diào)控作用滯后或植物體內(nèi)缺乏干擾素受體，導致外源基因表達的干擾素誘導或調(diào)控作用減弱
實驗得到的干擾素表達量較低，未能很好啟動機體產(chǎn)生抗性或病毒接種量過大，相對來說干擾素誘導調(diào)控作用滯后或植物體內(nèi)缺乏干擾素受體，導致外源基因表達的干擾素誘導或調(diào)控作用減弱
。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】雞干擾素基因兩端的部分核苷酸序列；GAATTC；GGATCC；AC；復制原點；Ca2+；逆轉(zhuǎn)錄；雞干擾素基因未能導入煙草愈傷組織細胞或?qū)霟煵萦鷤M織細胞的雞干擾素基因未能轉(zhuǎn)錄；22；實驗得到的干擾素表達量較低，未能很好啟動機體產(chǎn)生抗性或病毒接種量過大，相對來說干擾素誘導調(diào)控作用滯后或植物體內(nèi)缺乏干擾素受體，導致外源基因表達的干擾素誘導或調(diào)控作用減弱
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：233引用：3難度：0.3
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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