甘藍型油菜中,抑制PEP基因的表達可提高油菜籽的含油量。通過基因工程將PEP基因反向連接在啟動子后,構(gòu)建轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜是提高油菜籽含油量的常用技術(shù)路徑。請回答下列問題:
(1)為將PEP基因反向連接在啟動子后,構(gòu)建反義PEP基因,需要將限制酶切位點設(shè)計在引物上,PEP基因的上游引物和下游引物中應(yīng)分別引入 ScaⅠ、HamHⅠScaⅠ、HamHⅠ酶切位點。
(2)用激光照射油菜愈傷組織時,可在細胞膜上打出一個穿孔,轉(zhuǎn)反義PEP基因表達載體由此小孔進入油菜細胞,幾秒種后小孔封閉,該過程體現(xiàn)了細胞膜具有 流動性流動性。目的基因表達載體進入細胞后,Ti質(zhì)粒上的 T-DNAT-DNA區(qū)段可轉(zhuǎn)移到油菜細胞的基因組中。
(3)篩選時,需在油菜愈傷組織培養(yǎng)基中加入 新霉素新霉素進行初步選擇。在激光照射下,存活的細胞一般會發(fā)出 綠色熒光綠色熒光。為檢測反義PEP基因是否整合到染色體上,研究者通常用檢測細胞中是否存在ntp基因,而不檢測PEP基因。不直接檢測PEP基因的原因是 油菜細胞的基因組中本身有PEP基因油菜細胞的基因組中本身有PEP基因。
(4)已知PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板鏈為A鏈,則反義PEP基因的轉(zhuǎn)錄模板為 B鏈B鏈。轉(zhuǎn)反義PEP基因油菜中PEP基因的表達受阻,原因是 以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈,抑制了PEP基因的表達以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈,抑制了PEP基因的表達。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】ScaⅠ、HamHⅠ;流動性;T-DNA;新霉素;綠色熒光;油菜細胞的基因組中本身有PEP基因;B鏈;以B鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA與以A鏈為模板轉(zhuǎn)錄出的RNA配對形成雙鏈,抑制了PEP基因的表達
【解答】
【點評】
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