已知組成型啟動子可以高效地啟動目的基因在植物各種組織中的表達，但常會阻礙植物的生長發(fā)育。誘導型啟動子可在特定環(huán)境條件下誘導目的基因的表達。沙冬青脫水素基因（AmDHN基因）能使植株具有較強的抗旱作用。科研人員通過構建AmDHN基因表達載體，以培育耐旱苜蓿新品種，所用載體如圖1所示，請回答下列問題：
| 限制酶 | Be1Ⅰ | SacⅠ | BamHⅠ | PstⅠ | SmaⅠ |
| 識別序列和酶切位點 | T↓GATCA | GAGCT↓C | G↓GATCC | CTGCA↓G | CCC↓GGG |
組成型
組成型
啟動子。（2）如表是科研人員擴增Rd29A啟動子所設計的引物，根據引物的堿基序列及限制酶的識別序列分析，構建載體2時選用的限制酶是
SacⅠ和SmaⅠ
SacⅠ和SmaⅠ
。為了改造載體1中的啟動子，需要用 BclⅠ和SacⅠ
BclⅠ和SacⅠ
酶切割載體1、2為最佳。| 上游引物P1：5'-GACCCGGGTTTCCAAAGATTTTTTTC-3' 下游引物P2：5'-GAGAGCTCTGGGGTTTTGCTTTTGAATGT-3' |
農桿菌
農桿菌
，再轉化苜蓿。轉化后應在培養(yǎng)基中添加 新霉素
新霉素
進行篩選。（4）為檢測轉基因苜蓿中AmDHN基因的表達水平，科研人員做了相關實驗。如表呈現了部分操作步驟，請完成表格：
| 實驗步驟的目的 | 簡要操作過程 |
| ① 使幼苗適應外界的自然環(huán)境（進行煉苗）材料處理 使幼苗適應外界的自然環(huán)境（進行煉苗）材料處理 |
在轉基因無菌苗根系長至 2～3 cm 時，將培養(yǎng)無菌苗三角瓶的封口膜打開，培養(yǎng)一周，觀察其生長狀況 |
| 提供適宜生長條件 | 將甲組幼苗根系置于300mL水中 |
| 模擬干旱脅迫條件 | ② 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中 |
| 無關變量控制 | 將甲、乙兩組置于溫度、光照等條件適宜且相同的環(huán)境中培養(yǎng)8h,之后剪取兩組葉片放在液氮中儲存 |
| ③ 檢測PCR擴增產物量，估算目的基因的表達量 檢測PCR擴增產物量，估算目的基因的表達量 |
對葉片研磨、離心后，提?、?!--BA--> （總）RNA （總）RNA ，以AmDHN和MtActin基因⑤兩端脫氧核苷酸序列 兩端脫氧核苷酸序列 為依據設計引物，進行RT-PCR擴增，其中MtActin（一種細胞骨架蛋白）為內參。擴增產物用⑥瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖凝膠電泳 檢測，EB（溴化乙錠）染色照相如圖。 |
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】組成型；SacⅠ和SmaⅠ；BclⅠ和SacⅠ；農桿菌；新霉素；使幼苗適應外界的自然環(huán)境（進行煉苗）材料處理；將乙組幼苗根系置于等量的20%PEG溶液中；檢測PCR擴增產物量，估算目的基因的表達量；（總）RNA；兩端脫氧核苷酸序列；瓊脂糖凝膠電泳
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/8/3 8:0:9組卷：11難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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