λ噬菌體的遺傳物質(zhì)是雙鏈線狀DNA,其DNA兩端的5′端是由12個(gè)堿基組成的互補(bǔ)黏性末端(cos位點(diǎn)),常作為基因工程的載體,轉(zhuǎn)化頻率比質(zhì)粒高1000倍以上。如圖是置換型λ噬菌體基因組的結(jié)構(gòu)和連接過(guò)程的示意圖,如表是若干種限制酶及其識(shí)別的序列,箭頭處表示酶切位點(diǎn)。填充片段用于置換目的基因片段,其兩端含有多個(gè)限制酶酶切位點(diǎn)。回答下列問(wèn)題:
限制酶 | BamHⅠ | EcoRⅠ | MobⅠ | AclⅠ |
識(shí)別的序列 | G↓GATCC | G↓AATTC | ↓GATC | AA↓CGTT |
λ噬菌體DNA兩端的cos位點(diǎn)可堿基互補(bǔ)配對(duì)相互連接
λ噬菌體DNA兩端的cos位點(diǎn)可堿基互補(bǔ)配對(duì)相互連接
。XbaⅠ識(shí)別的堿基序列是 5′-CTCGAG-3′
5′-CTCGAG-3′
。過(guò)程②利用 DNA聚合
DNA聚合
酶補(bǔ)平黏性末端,加入的核苷酸是 胸腺嘧啶脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸
胸腺嘧啶脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸
。(2)置換載體用XbaⅠ切割并用脫氧核苷酸補(bǔ)平后,外源目的基因用表中的限制酶
BamHⅠ或MobⅠ
BamHⅠ或MobⅠ
處理,再用腺嘌呤脫氧核苷酸、鳥嘌呤脫氧核苷酸補(bǔ)平,經(jīng)DNA連接酶處理后可將目的基因替換到λ噬菌體上。與不補(bǔ)平黏性末端相比,上述操作方法的優(yōu)點(diǎn)是可以避免 ①酶切后的λ噬菌體DNA的兩個(gè)末端相連接,目的基因不能插入;②避免目的基因首尾連接
①酶切后的λ噬菌體DNA的兩個(gè)末端相連接,目的基因不能插入;②避免目的基因首尾連接
(答出兩點(diǎn)即可),從而提高目的基因與載體相連接的效率。(3)表面展示技術(shù)是通過(guò)重組DNA技術(shù),將外源蛋白與細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)組裝成融合蛋白,從而可展示在細(xì)胞表面。凝集素與脂多糖結(jié)合,可發(fā)生凝集反應(yīng)。研究人員將特異性識(shí)別藍(lán)細(xì)菌表面脂多糖的凝集素(一種蛋白質(zhì)),通過(guò)表面展示技術(shù)定位至芽孢桿菌的質(zhì)膜上,這一技術(shù)實(shí)現(xiàn)了
凝集素特異性識(shí)別并結(jié)合藍(lán)細(xì)菌,抑制藍(lán)細(xì)菌繁殖
凝集素特異性識(shí)別并結(jié)合藍(lán)細(xì)菌,抑制藍(lán)細(xì)菌繁殖
,應(yīng)用于修復(fù)水華現(xiàn)象。【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】λ噬菌體DNA兩端的cos位點(diǎn)可堿基互補(bǔ)配對(duì)相互連接;5′-CTCGAG-3′;DNA聚合;胸腺嘧啶脫氧核苷酸、胞嘧啶脫氧核苷酸;BamHⅠ或MobⅠ;①酶切后的λ噬菌體DNA的兩個(gè)末端相連接,目的基因不能插入;②避免目的基因首尾連接;凝集素特異性識(shí)別并結(jié)合藍(lán)細(xì)菌,抑制藍(lán)細(xì)菌繁殖
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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