重疊延伸PCR技術(shù)是常規(guī)PCR技術(shù)的衍生，它依據(jù)需要連接的基因中核苷酸序列（或基因片段）設(shè)計(jì)出多對(duì)具有互補(bǔ)末端的引物，先分段對(duì)模板進(jìn)行擴(kuò)增，再將PCR產(chǎn)物混合，其中的重疊鏈將相互搭橋、互為模板而延伸，最終實(shí)現(xiàn)不同來(lái)源的擴(kuò)增片段重疊拼接起來(lái)的目的，如圖1所示。請(qǐng)分析并回答下列問(wèn)題：
（1）圖1中的過(guò)程②在 22個(gè)反應(yīng)體系中進(jìn)行，原因是 引物互補(bǔ)影響PCR結(jié)果引物互補(bǔ)影響PCR結(jié)果。經(jīng)過(guò)程②后，體系中存在不同長(zhǎng)度的DNA片段，獲取所需DNA的方法是 瓊脂糖凝膠電泳分離瓊脂糖凝膠電泳分離。①中引物2和引物3的游離部分分別與 外顯子B、外顯子A外顯子B、外顯子A的部分序列同源。
（2）圖1中的過(guò)程⑥不需要不需要（填“需要”或“不需要”）另加引物，原因是 兩條DNA的交錯(cuò)部分即可作為其延伸的引物兩條DNA的交錯(cuò)部分即可作為其延伸的引物。進(jìn)行②⑥⑧⑩過(guò)程時(shí)，需要在一定的緩沖溶液中進(jìn)行，⑩過(guò)程除圖示條件還需要加入 四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶。
（3）重疊延伸PCR技術(shù)可用于基因的定點(diǎn)突變?；蚨c(diǎn)突變是根據(jù)目的基因（如圖2蛋白A基因）的序列，設(shè)計(jì)4條單鏈核苷酸片段為引物（圖2中的引物A→D），原理是取引物A、B進(jìn)行PCR1反應(yīng)，以及引物C、D進(jìn)行PCR2反應(yīng)，然后將需要的兩個(gè)片段混合、延伸并大量擴(kuò)增。圖2引物B和引物C中的“∧”代表 突變堿基突變堿基，引物B和引物C堿基序列間存在的關(guān)系是 互補(bǔ)互補(bǔ)。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；目的基因的篩選與獲取．
【答案】2；引物互補(bǔ)影響PCR結(jié)果；瓊脂糖凝膠電泳分離；外顯子B、外顯子A；不需要；兩條DNA的交錯(cuò)部分即可作為其延伸的引物；四種脫氧核苷酸、耐高溫的DNA聚合酶；突變堿基；互補(bǔ)
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：23引用：2難度：0.7
相似題
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過(guò)次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過(guò)的兩個(gè)過(guò)程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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