人乳鐵蛋白（hLF）對細菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人員開展人乳鐵蛋白基因乳腺特異性表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)染研究，主要流程如圖，圖中AseⅠ、NheⅠ、SalⅠ、BamHⅠ代表相關(guān)限制酶切點，neor為新霉素抗性基因，BLG基因為β-乳球蛋白基因，GFP基因為綠色熒光蛋白基因。請回答：
（1）過程①中，不能從人肌肉細胞中提取RNA用于RT-PCR，是因為hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達）hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達）。在RT-PCR過程中，加入的引物需在5'端添加SalI和BamHISalI和BamHI兩種限制酶的識別序列，以便于hLF基因插入pEB中。
（2）過程②中，hLF基因插入到BLG基因之后的目的是使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達。過程③中，使用人工膜制成的脂質(zhì)體將重組質(zhì)粒導入受體細胞，依據(jù)的主要原理是生物膜具有一定的流動性生物膜具有一定的流動性。
（3）將轉(zhuǎn)染后的山羊乳腺上皮細胞先置于含新霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，能夠存活的細胞應(yīng)該是導入pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒的細胞，再利用熒光顯微鏡觀察山羊乳腺上皮細胞中是否有綠色熒光是否有綠色熒光，以篩選出轉(zhuǎn)染成功的細胞。
（4）要獲得轉(zhuǎn)基因山羊，還需要將成功表達hLF的乳腺上皮細胞的細胞核移植到山羊去核的卵母去核的卵母細胞中，再借助早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植技術(shù)孕育出羊羔。
【考點】體外受精和胚胎移植．
【答案】hLF基因在人肌肉細胞中不轉(zhuǎn)錄（表達）；SalI和BamHI；使人乳鐵蛋白基因在山羊的乳腺細胞中表達；生物膜具有一定的流動性；pEB質(zhì)?；騪EBL質(zhì)粒；是否有綠色熒光；去核的卵母；早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：46引用：2難度：0.7
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