Lon1蛋白酶具有降解葉綠體和線粒體內(nèi)氧化蛋白、維持細(xì)胞正常代謝的功能。為揭示控制Lon1蛋白酶表達(dá)的藍(lán)莓VcLon1基因的生物學(xué)功能，并為其他植物抗旱機(jī)制研究提供基礎(chǔ)信息?？蒲泄ぷ髡咄ㄟ^獲得轉(zhuǎn)基因本氏煙植株來進(jìn)行干旱生理分析。回答下列問題：
（1）為獲得VcLon1基因，科研人員用藍(lán)莓基因組DNA為模版，根據(jù) VcLon1 基因的核苷酸序列VcLon1 基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增的原理是 DNA的復(fù)制DNA的復(fù)制。在進(jìn)行①過程時，選用兩種酶同時切割是為了防止一種酶切割時造成 目的基因與載體反向連接/自身連接目的基因與載體反向連接/自身連接。
（2）在進(jìn)行③過程時，需要用酒精溶液和 次氯酸鈉（或氯化汞）次氯酸鈉（或氯化汞）溶液進(jìn)行消毒，最后使用無菌水清洗。在④過程中使用的培養(yǎng)基中需加入一定量的蔗糖，作用是 提供碳源，維持培養(yǎng)基的滲透壓提供碳源，維持培養(yǎng)基的滲透壓（答出2點(diǎn)即可）。
（3）在⑤過程中，將本氏煙細(xì)胞與農(nóng)桿菌混合后共培養(yǎng)，旨在讓目的基因進(jìn)入本氏煙細(xì)胞，影響該過程成功的因素，除溫度等環(huán)境因素外，還可能是 共培養(yǎng)時間；農(nóng)桿菌的種類和活性等；受體細(xì)胞的生理狀態(tài)等共培養(yǎng)時間；農(nóng)桿菌的種類和活性等；受體細(xì)胞的生理狀態(tài)等（答出2點(diǎn)即可）。除了本實(shí)驗(yàn)采用的方法，還可采用 電擊法、基因槍法、花粉管通道法等電擊法、基因槍法、花粉管通道法等法將VcLon1基因?qū)胫参锸荏w細(xì)胞。
（4）在⑦過程中，試管苗需要移栽至適宜的光照和溫度下，并逐漸 降低降低濕度進(jìn)行適應(yīng)鍛煉后方可移栽至自然環(huán)境中種植。
（5）科研人員經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因煙草植株1-10中 33號植株未成功導(dǎo)入外源基因VcLon1，而WT植株則不能擴(kuò)增出2982bp條帶。隨后利用了半定量PCR分析外源基因VcLon1在本氏煙中的表達(dá)，其結(jié)果如圖2，因此后續(xù)可取 1、2、4、6-91、2、4、6-9號轉(zhuǎn)基因本氏煙植株作為干旱生理分析的試驗(yàn)材料。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】VcLon1 基因的核苷酸序列；DNA的復(fù)制；目的基因與載體反向連接/自身連接；次氯酸鈉（或氯化汞）；提供碳源，維持培養(yǎng)基的滲透壓；共培養(yǎng)時間；農(nóng)桿菌的種類和活性等；受體細(xì)胞的生理狀態(tài)等；電擊法、基因槍法、花粉管通道法等；降低；3；1、2、4、6-9
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布：2024/9/28 1:0:2組卷：5引用：1難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號）。過程②③采用的方法是。
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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