某科研小組通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將黑麥草的抗旱基因P轉(zhuǎn)入野生型擬南芥，以驗證基因P的功能。其流程如圖所示?；卮鹣铝袉栴}：
（1）利用PCR技術(shù)從黑麥草的DNA中分離并克隆目的基因P，不需要不需要 （ 填“需要”或“不需要”）用限制酶進行預(yù)處理，其原因是使用基因特異性引物可以從模板DNA中擴增出特定基因使用基因特異性引物可以從模板DNA中擴增出特定基因。
（2）用SmalⅠ和SalⅠ這兩種限制酶分別對含有基因P的DNA和質(zhì)粒進行雙酶切，然后連接形成①重組質(zhì)粒（重組DNA分子、基因表達載體）重組質(zhì)粒（重組DNA分子、基因表達載體）。與雙酶切相比，用同一種限制酶對二者進行單酶切的缺點是容易造成基因P或質(zhì)粒自身環(huán)化、基因P和質(zhì)粒反向連接基因P和質(zhì)粒反向連接。
（3）將②的花序浸入農(nóng)桿菌懸浮液以實現(xiàn)轉(zhuǎn)化。在適宜條件下培養(yǎng)，收獲②的種子，在含潮霉素（一種抗生素）的MS培養(yǎng)基上篩選得到③，這表明質(zhì)粒載體攜帶的選擇標記是潮霉素抗性基因潮霉素抗性基因。
（4）基因P表達的蛋白P是脯氨酸合成過程所需的一種關(guān)鍵酶。而脯氨酸在細胞中的積累既可提高植物的抗旱性。又可抑制蛋白P的酶活性。研究發(fā)現(xiàn)，蛋白P的第128位苯丙氨酸若變?yōu)楸彼帷Ｔ撘种谱饔脛t顯著降低。請據(jù)此提出進一步提高植物抗旱性的一種簡要思路。定點誘變改造目的基因P使其編碼的蛋白P的第128位苯丙氨酸替換為丙氨酸；將改造后的基因轉(zhuǎn)入受體植物，以期提高受體植物的抗旱性定點誘變改造目的基因P使其編碼的蛋白P的第128位苯丙氨酸替換為丙氨酸；將改造后的基因轉(zhuǎn)入受體植物，以期提高受體植物的抗旱性。
【答案】不需要；使用基因特異性引物可以從模板DNA中擴增出特定基因；重組質(zhì)粒（重組DNA分子、基因表達載體）；基因P和質(zhì)粒反向連接；潮霉素抗性基因；定點誘變改造目的基因P使其編碼的蛋白P的第128位苯丙氨酸替換為丙氨酸；將改造后的基因轉(zhuǎn)入受體植物，以期提高受體植物的抗旱性
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：12引用：3難度：0.7
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1．人類基因組計劃測定了人體的24條染色體，這24條染色體是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 0:30:1組卷：112引用：7難度：0.7 -
2．基因編輯是指將外源DNA片段導(dǎo)入染色體DNA特定位點或刪除基因內(nèi)部片段，定點改造基因，獲得預(yù)期的生物體基因序列發(fā)生改變的技術(shù)。如圖是對某生物B基因進行基因編輯的過程，該過程中用sgRNA指引內(nèi)切核酸酶Cas9結(jié)合到特定的靶位點。下列分析不合理的是（ ?。?/h2>發(fā)布：2024/12/30 21:30:1組卷：4引用：2難度：0.7 -
3．學(xué)習(xí)以下材料，回答（1）～（4）題。
利用抑制性tRNA進行無義突變遺傳病的治療
無義突變是由于某個堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子（UAA、UAG或UGA），從而使肽鏈合成提前終止，造成蛋白質(zhì)的功能改變，引發(fā)相關(guān)疾病。約有10%～15%的人類基因相關(guān)遺傳疾病是由無義突變引發(fā)的。常規(guī)的基因治療是將正常基因的cDNA序列或是有治療價值的基因（如CRISPR-Cas9相關(guān)的基因編輯工具）通過一定的方式導(dǎo)入人體靶細胞內(nèi)，達到替代或修復(fù)缺陷基因、治療疾病的目的。導(dǎo)入基因插入位置不當(dāng)、過高或過低表達，都可能會導(dǎo)致副作用。盡管基因編輯可以實現(xiàn)生理水平的基因表達，但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發(fā)強烈的免疫反應(yīng)仍然是巨大的挑戰(zhàn)。
抑制性tRNA（sup-tRNA）由天然tRNA改造而來，它的反密碼子通過堿基配對原則可以識別無義突變的終止密碼子，使得mRNA在翻譯至無義突變位點時不啟動翻譯終止而是繼續(xù)向后進行翻譯，獲得有功能的全長蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因，是相關(guān)基因發(fā)生無義突變，產(chǎn)生終止密碼子UAG。研究者構(gòu)建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體（圖1），以及針對該無義突變設(shè)計的sup-tRNA表達載體（產(chǎn)生的sup-tRNA能夠識別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡寫作sup-tRNATyr），將其導(dǎo)入細胞進行研究，發(fā)現(xiàn)與具有相似作用的化合物G418比較，sup--tRNA的作用更加顯著（圖2）；進一步利用重組腺相關(guān)病毒作為載體將sup-tRNA導(dǎo)入患病小鼠模型中，實驗顯示能夠降低黏多糖過度積存，實現(xiàn)對該病癥的有效治療，其療效可以持續(xù)半年以上。
從整體來看，G418在促進跨越無義突變位點繼續(xù)翻譯時引入的氨基酸較為隨機，而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一，且不會影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài)，所以sup-tRNA在個體治療中具有很高的安全性，因而在未來基因突變引起的疾病相關(guān)治療中具有非常大的應(yīng)用前景。
（1）侵染時，作為載體的重組腺相關(guān)病毒與靶細胞膜上的發(fā)生識別，引發(fā)內(nèi)吞，進入細胞后釋放單鏈DNA作為模板，利用宿主細胞的催化合成其互補DNA鏈，再經(jīng)過過程產(chǎn)生sup-tRNA。
（2）除了引入的氨基酸較為單一，不影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài)，我們還可推斷，用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處（填“能”或“不能”）繼續(xù)往后翻譯，具有很高的安全性。
（3）研究者構(gòu)建mldua突變基因和Flag基因融合的載體，目的是通過檢測來確定是否跨越無義突變位點繼續(xù)向后翻譯。實驗結(jié)果表明，相比于化合物G418，sup-tRNA在促進無義突變位點的翻譯方面更加有效，支持這一結(jié)論的依據(jù)是：。
（4）有文獻報道，已在近1000個不同的人類基因中發(fā)現(xiàn)了7500多個無義突變。常規(guī)的基因治療需要為每種疾病設(shè)計獨特的治療策略，這將是一項耗費驚人的項目。據(jù)此說明sup-tRNA的應(yīng)用價值。發(fā)布：2025/1/3 8:0:1組卷：26引用：1難度：0.6
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