豬源大腸桿菌會引起仔豬發(fā)生腸炎、腸毒血癥等疾病。LTB和ST1是豬源大腸桿菌腸毒素基因,融合基因LTB-ST1的表達(dá)產(chǎn)物L(fēng)TB-ST1融合蛋白可有效預(yù)防仔豬黃痢。構(gòu)建融合基因的方法如圖1所示。請回答:
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(1)豬源大腸桿菌與豬細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上最主要的區(qū)別是 無以核膜為界限的細(xì)胞核無以核膜為界限的細(xì)胞核,豬源大腸桿菌與豬的種間關(guān)系為 寄生寄生。
(2)在對LTB基因與ST1基因進(jìn)行PCR過程中,DNA解旋的方法是 高溫高溫,若引物中C或G的堿基數(shù)量越高,則復(fù)性的溫度會 升高升高(選填“升高”、“降低”或“不變”)。
(3)圖1中限制酶1使得LTB基因中的 磷酸二酯磷酸二酯鍵斷裂。為保證經(jīng)酶處理后的LTB基因與ST1基因能夠正常連接,限制酶1與限制酶2在選取時需滿足 以形成相同的黏性末端以形成相同的黏性末端的特點,可見這種融合基因的方法具有局限性。
(4)為突破限制酶選取的局限性,研究人員通過重組PCR技術(shù)構(gòu)建了LTB-ST1融合基因,如圖2所示,請回答:
①重組PCR技術(shù)依據(jù)的生物學(xué)原理是 DNA(半保留)復(fù)制DNA(半保留)復(fù)制。PCR1和PCR2需要在兩個不同反應(yīng)體系中進(jìn)行的原因是 引物P2與P3可發(fā)生部分堿基互補配對,在同一個體系中無法正常完成復(fù)性過
程引物P2與P3可發(fā)生部分堿基互補配對,在同一個體系中無法正常完成復(fù)性過
程,兩個反應(yīng)體系中加入的物質(zhì)中不同的是 引物、模板引物、模板。下列序列中符合引物P2與引物P3的5′末端堿基序列要求的是:ADAD。
A.5'ATCGGACTTG?3'
B.5'ATCGGAGAAC?3'
C.5′TAGCCTGAAC?3'
D.5′CAAGTCCGAT?3'
②重組PCR技術(shù)不僅可用于構(gòu)建融合基因,還可用于研究基因定點突變。若要在兩個基因連接處實現(xiàn)基因定點突變,可對 引物P2與P3引物P2與P3進(jìn)行設(shè)計,后通過重組PCR,使新合成的DNA中含有突變位點,從而實現(xiàn)基因的定點突變。
程
程
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】無以核膜為界限的細(xì)胞核;寄生;高溫;升高;磷酸二酯;以形成相同的黏性末端;DNA(半保留)復(fù)制;引物P2與P3可發(fā)生部分堿基互補配對,在同一個體系中無法正常完成復(fù)性過
程;引物、模板;AD;引物P2與P3
程;引物、模板;AD;引物P2與P3
【解答】
【點評】
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