CBF1基因過量表達能提高擬南芥植株的抗寒性。苜蓿是飼草料產業(yè)發(fā)展的主要草種，低溫等逆境脅迫會導致苜蓿減產?？蒲腥藛T從擬南芥植株中克隆得到冷誘導轉錄因子（At-CBF1）基因，通過轉基因技術培育抗寒紫花苜蓿，以使苜蓿安全越冬和提高產量。回答下列問題：
（1）在擴增At-CBF1基因的過程中，先根據 At-CBF1基因的核苷酸序列At-CBF1基因的核苷酸序列設計引物，再進行PCR擴增。擴增時，反應體系的初始溫度設置在90～95℃的目的是 使目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈使目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈。PCR過程中需要使用 Taq（或耐高溫的DNA聚合聚合）Taq（或耐高溫的DNA聚合聚合）酶。
（2）回收PCR產物并酶切后用 DNA連接酶DNA連接酶將At-CBF1 基因連接到T質粒上，以得到T-CBF1重組質粒。構建T-CBF1重組質粒時，同時使用BamHⅠ和SacⅠ進行雙酶切的目的是 產生不同的黏性末端，使目的基因和質粒定向連接產生不同的黏性末端，使目的基因和質粒定向連接。
（3）將目的基因導入受體細胞，培育后篩選轉化陽性的植株。若采用分子雜交技術檢測轉基因紫花苜蓿植株目的基因的轉錄水平，則需要將 放射性標記的 At-CBF1基因放射性標記的 At-CBF1基因片段制成探針。
（4）為進一步研究轉基因紫花苜蓿的抗寒機制，還需要進一步開展研究。請完成如圖研究技術路線圖。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】At-CBF1基因的核苷酸序列；使目的基因 DNA受熱變性后解鏈為單鏈；Taq（或耐高溫的DNA聚合聚合）；DNA連接酶；產生不同的黏性末端，使目的基因和質粒定向連接；放射性標記的 At-CBF1基因
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權屬菁優(yōu)網所有，未經書面同意，不得復制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：1難度：0.7
相似題
-
1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7