人腺病毒3型能引起人產(chǎn)生急性呼吸系統(tǒng)疾病（ARD），具有較高的發(fā)病率和一定的致死率。研究人員利用人腺病毒5型商品化的質(zhì)粒P5和基因工程等技術(shù)，構(gòu)建新型的復(fù)制缺陷型腺病毒3型疫苗，用于預(yù)防ARD。

（1）腺病毒衣殼的H蛋白能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體。研究人員通過同源重組的方法利用質(zhì)粒p5和重組質(zhì)粒p3構(gòu)建重組腺病毒3型表達(dá)載體pr3，并獲得重組腺病毒3型株。過程如圖1。
①實驗中利用

PCR

PCR

技術(shù)擴(kuò)增人腺病毒3型的H基因（H3），選用限制酶

EcoRV和XhoⅠ

EcoRV和XhoⅠ

和DNA連接酶以確保H3基因能正確連接在p3質(zhì)粒的特定位置。
②p5質(zhì)粒上由于缺失E1基因，表現(xiàn)復(fù)制缺陷。P3質(zhì)粒與p5質(zhì)粒的左臂與右臂存在相同的硪基序列，易發(fā)生

交換

交換

，有利于得到同源重組的pr3質(zhì)粒，使之表現(xiàn)為與p5質(zhì)粒相同的復(fù)制缺陷。pr3質(zhì)粒經(jīng)PacI酶處理后，將得到的DNA片段轉(zhuǎn)染至A2細(xì)胞（能夠表達(dá)E1蛋白）中，獲得重組腺病毒3型株。轉(zhuǎn)染至A2細(xì)胞中的DNA片段存在與

有H3蛋白、人源熒光蛋白、H5蛋白（病毒的衣殼蛋白）

有H3蛋白、人源熒光蛋白、H5蛋白（病毒的衣殼蛋白）

蛋白合成有關(guān)的基因。
（2）為評估重組腺病毒3型株作為抗原的有效性，研究人員使用抗H3單克隆抗體檢測H3基因在A2細(xì)胞中的表達(dá)情況，結(jié)果如圖2。
實驗結(jié)果表明：

在重組腺病毒3型株的H3基因可在A2細(xì)胞表達(dá)，說明重組腺病毒3型株作為抗原的是有效的

在重組腺病毒3型株的H3基因可在A2細(xì)胞表達(dá)，說明重組腺病毒3型株作為抗原的是有效的

。
（3）為評估重組腺病毒3型株疫苗的安全性，分別用其感染A2細(xì)胞和A5細(xì)胞（與人體正常體細(xì)胞相同，不能表達(dá)E1蛋白），至少培養(yǎng)20代。在熒光顯微鏡下檢測重組腺病毒3型株的繁殖情況，預(yù)期結(jié)果為

A2細(xì)胞可檢測到大量的熒光，重組腺病毒3型進(jìn)行了繁殖；在A5細(xì)胞幾乎檢測不到熒光，重組腺病毒3型沒有繁殖

A2細(xì)胞可檢測到大量的熒光，重組腺病毒3型進(jìn)行了繁殖；在A5細(xì)胞幾乎檢測不到熒光，重組腺病毒3型沒有繁殖

，說明疫苗安全。