Cre-loxP系統(tǒng)由Cre酶和loxP序列兩部分組成(如圖1所示)。研究人員可以誘導(dǎo)Cre酶基因在特定的組織中表達(dá)并識(shí)別loxP序列。loxP序列由位于兩端區(qū)域的方向重復(fù)序列和中間區(qū)域的8個(gè)堿基對(duì)共同組成。Cre-loxP系統(tǒng)通常需要培養(yǎng)兩類(lèi)轉(zhuǎn)基因小鼠。以mTmG模型小鼠為例,研究人員要在第一組小鼠(無(wú)Cre酶基因)的一對(duì)同源染色體上均添加pCA序列(啟動(dòng)子)、mT(紅色熒光蛋白基因)、mG(綠色熒光蛋白)和pA序列(基因表達(dá)終止),并且在mT和pA的兩端分別插入一個(gè)loxP序列,在第二組小鼠內(nèi)導(dǎo)入Cre酶基因,然后讓純合的兩組小鼠雜交,獲得F1,在F1小鼠的特定組織中Cre酶基因能夠表達(dá)實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的敲除,如圖2所示?;卮鹣铝袉?wèn)題:
(1)loxP序列的方向是由圖1中的區(qū)域 22(填序號(hào))決定的。經(jīng)Cre酶敲除后獲得的片段1有 00個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。
(2)mT/mG模型小鼠的pCA序列是 RNA聚合RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的位點(diǎn)。第一組小鼠的組織細(xì)胞發(fā)出 紅紅色熒光,F(xiàn)1小鼠的表達(dá)Cre酶基因的特定組織細(xì)胞發(fā)出 綠綠色熒光,原因是 由于表達(dá)Cre酶,將兩個(gè)同向的loxP序列之間的mT序列和pA序列敲除,mG基因表達(dá),發(fā)出綠色熒光由于表達(dá)Cre酶,將兩個(gè)同向的loxP序列之間的mT序列和pA序列敲除,mG基因表達(dá),發(fā)出綠色熒光。
(3)若要獲得mT基因被敲除的純合小鼠,應(yīng)該采用 F1雌雄小鼠相互交配F1雌雄小鼠相互交配雜交方法,理論上子代中mT基因被敲除的純合小鼠的比例是 1414。
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【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合.
【答案】2;0;RNA聚合;紅;綠;由于表達(dá)Cre酶,將兩個(gè)同向的loxP序列之間的mT序列和pA序列敲除,mG基因表達(dá),發(fā)出綠色熒光;F1雌雄小鼠相互交配;
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【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/16 8:0:10組卷:4引用:2難度:0.5
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