如圖所示為三種質粒和一個含目的基因的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因（能使含該基因的大腸桿菌菌落呈藍色）。圖中EcoRⅠ、PvuⅠ為兩種限制酶，括號內的數(shù)字表示限制酶切割位點與復制原點的距離。請據(jù)圖分析并回答問題：
（1）若需獲得圖中目的基因，可選用PvuⅠPvuⅠ限制酶。
（2）片段D是目的基因中的某一片段，下列敘述錯誤的有abcabc（填字母）。
a.該圖中含有兩個密碼子
b.圖中③和④代表兩個不同的脫氧核苷酸
c.若只用該片段中的3個堿基對，可以排列出43種片段
d.DNA聚合酶和DNA連接酶都可作用于②處，解旋酶作用中①處
（3）圖中最適合作為目的基因運載體的質粒是B，而A、C兩種質粒不能作為運載體的理由分別是A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制。
（4）用目的基因和質粒B構建重組質粒后用EcoRⅠ完全酶切并進行電泳觀察，可出現(xiàn)長度為1.1kb和5.65.6kb,或者3.13.1kb和3.63.6kb的片段。（重組質粒上目的基因的插入位點與EcoRⅠ的識別位點之間的堿基對忽略不計）
（5）將分別用限制酶PvuⅠ切開的質粒B溶液與目的基因溶液混合，加入DNA連接酶連接后，并進行導入大腸桿菌受體細胞的操作之后，從菌落的顏色和對抗生素抗性的角度分析，受體細胞的類型有33種。若菌落表現(xiàn)為具有氨芐青霉素抗性、不呈藍色，說明導入對應受體細胞的DNA為重組質粒（或質粒B-目的基因連接）或質粒B-質粒B反向連接重組質粒（或質粒B-目的基因連接）或質粒B-質粒B反向連接。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】PvuⅠ；abc；A缺少標記基因；質粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復制原點會被限制酶切割，會影響重組質粒的自主復制；5.6；3.1；3.6；3；重組質粒（或質粒B-目的基因連接）或質粒B-質粒B反向連接
【解答】
【點評】
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
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