黃瓜花葉病毒(CMV)是能侵染多種植物的RNA病毒,可危害番茄的正常生長并造成減產。研究人員通過農桿菌介導將該病毒外殼蛋白的cDNA導入番茄植株中,成功獲得抗CMV的番茄植株。
(1)獲得CMV的RNA后,需在逆轉錄逆轉錄酶的催化下才能合成CMV外殼蛋白的cDNA。
(2)獲得cDNA后,需先通過一定方法將其插入到農桿菌Ti質粒的T-DNAT-DNA片段中,然后將番茄子葉切段與該農桿菌共同培養(yǎng),以實現(xiàn)對番茄細胞的轉化。
(3)將經共同培養(yǎng)后的番茄外植體接種于含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間,只有部分外植體生出愈傷組織。研究人員據(jù)此確定這些生出愈傷組織的外植體都已成功導入了cDNA,你認為他們做出以上判斷的理由是重組表達載體同時含有卡那霉素抗性基因和青霉素抗性基因,只有成功導入了重組質粒的外植體才能在含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上生出愈傷組織重組表達載體同時含有卡那霉素抗性基因和青霉素抗性基因,只有成功導入了重組質粒的外植體才能在含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上生出愈傷組織。愈傷組織經再分化再分化長出小芽后還需要轉入生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基誘導生根。
(4)要想確定轉基因番茄已經成功表達出CMV外殼蛋白,需要進行抗原-抗體雜交抗原-抗體雜交實驗。
(5)研究人員用強致病力的CMV分別感染轉基因番茄與未轉基因的番茄未轉基因的番茄,通過對照發(fā)現(xiàn)轉基因番茄具有較好的抗CMV能力。轉基因番茄自交,子代中抗性植株與敏感植株數(shù)量之比接近3:1,由此可以得出的結論是目的基因已經整合到受體細胞的染色體上目的基因已經整合到受體細胞的染色體上;獲得的轉基因親本為雜合子獲得的轉基因親本為雜合子(答出兩點)。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】逆轉錄;T-DNA;重組表達載體同時含有卡那霉素抗性基因和青霉素抗性基因,只有成功導入了重組質粒的外植體才能在含有卡那霉素和青霉素的選擇培養(yǎng)基上生出愈傷組織;再分化;生根培養(yǎng)基;抗原-抗體雜交;未轉基因的番茄;目的基因已經整合到受體細胞的染色體上;獲得的轉基因親本為雜合子
【解答】
【點評】
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