嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶（BglB酶）是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開(kāi)展了以下實(shí)驗(yàn)：
Ⅰ．利用大腸桿菌表達(dá)BgIB酶
（1）PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用

嗜熱土壤芽孢桿菌

嗜熱土壤芽孢桿菌

的基因組DNA作模板。
（2）如圖1為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶的識(shí)別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入限制酶

NdeⅠ、BamHⅠ

NdeⅠ、BamHⅠ

的識(shí)別序列。

（3）先用Ca²⁺處理大腸桿菌后再將上述構(gòu)建好的表達(dá)載體與之混合，原因是：

使大腸桿菌處于能夠吸收周?chē)h(huán)境中的DNA分子的狀態(tài)

使大腸桿菌處于能夠吸收周?chē)h(huán)境中的DNA分子的狀態(tài)

。請(qǐng)?zhí)岢鲈趥€(gè)體生物學(xué)水平篩選出重組大腸桿菌的簡(jiǎn)要實(shí)驗(yàn)思路及依據(jù)：

配制以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)混合大腸桿菌，重組大腸桿菌能產(chǎn)生BglB酶因而能在選擇培養(yǎng)基中生存而普通大腸桿菌不能生存

配制以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)混合大腸桿菌，重組大腸桿菌能產(chǎn)生BglB酶因而能在選擇培養(yǎng)基中生存而普通大腸桿菌不能生存

。
Ⅱ．溫度對(duì)BgIB酶活性的影響
（4）溫度會(huì)影響B(tài)glB酶活性及其穩(wěn)定性，從而影響其對(duì)纖維素的分解效率，該實(shí)驗(yàn)為實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中對(duì)反應(yīng)溫度的控制提供理論依據(jù)。綜合分析圖2，3實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可得出實(shí)驗(yàn)結(jié)論：

BglB酶的最適溫度在60℃-70℃，在70℃下酶的熱穩(wěn)定性下降，而在60℃下基本不變，在實(shí)際應(yīng)用中反應(yīng)溫度應(yīng)控制在60℃

BglB酶的最適溫度在60℃-70℃，在70℃下酶的熱穩(wěn)定性下降，而在60℃下基本不變，在實(shí)際應(yīng)用中反應(yīng)溫度應(yīng)控制在60℃

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注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過(guò)其活性的保持程度來(lái)反映的。
Ⅲ．利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性
（5）在PCR擴(kuò)增bglB基因的過(guò)程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過(guò)篩選，可獲得能表達(dá)出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽孢桿菌相比，上述育種技術(shù)獲得熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR過(guò)程中

僅針對(duì)bglB基因進(jìn)行誘變；bglB基因可快速累積突變

僅針對(duì)bglB基因進(jìn)行誘變；bglB基因可快速累積突變

（寫(xiě)出一點(diǎn)即可）。